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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | Picogreen 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | Picogreen | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
在分子生物学的试验过程中，PicoGreen dsDNA 定量试剂盒是荧光检测双链 DNA 并进行定量的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术中的：cDNA文库的构建；用于亚克隆的 DNA片段纯化及应用，比如进行DNA定量、产物扩增和引物的进一步检测。 疫苗是现代疾病预防中常用的控制方式。如今许多疫苗是细胞培养疫苗，比如重组乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多数疫苗都采用细胞培养的方法生产。其中，疫苗的纯化是关键问题，我们需要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。
常规的DNA含量的检测方法是在260nm（A260）处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA，而且这种方法不灵敏（5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1）。PicoGreen定量检测方法简单、方便，被多家生物制品厂所选择，成为生物制品残留DNA检测的标准。
常规的DNA含量的检测方法是在260nm（A260）处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA，而且这种方法不灵敏（5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1）。PicoGreen定量检测方法简单、方便，被多家生物制品厂所选择，成为生物制品残留DNA检测的标准。
操作步骤：
一：试剂制备
1：PicoGreen dsDNA 定量试剂是以0.1-1mL的浓缩液形式保存在DMSO中。实验当天，配制2X PicoGreen试剂的操作溶液，用1x TE按1:200的比例稀释浓缩液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH7.5）。如果要准备足够的操作溶液测定 20 个样品，可在 20mL 1x TE 中加入100μL PicoGreen dsDNA定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。PicoGreen 试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
二：实验方法
1：标准品工作液的配制
小牛胸腺嘧啶DNA干粉，加入1mL双蒸水，配制成1mg∕mL的标准品工作液。
2：染料工作液的配置
6 uL PicoGreen加入1mL TE(注意：用1×TE将PicoGreen稀释200倍，现用现配，注意避光)。
3：标准品工作液稀释
1）母液稀释：取10ul（1mg/mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成10ug/mL，取10ul（10ug/mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成100ng/mL。
2）倍比稀释：取800ul（100ng/mL）的标准品工作液加入到200ul TE溶液中，浓度达到80ng/mL（药典规定：荧光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范围线性较好， 该法DNA检出限为0.3 ng/ml），取500ul（80ng/mL）的标准品工作液加入到500ul TE溶液中，浓度稀释到40ng/mL；依次倍比稀释，配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的标准品溶液。
3）标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100ul混匀，避光室温放置5min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank，测定样品和空白对照的荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/ml）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。
4）测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA 浓度的标准曲线。
相关产品:
PS1342 Green dsDNA for Qubit定量检测试剂盒
1：PicoGreen dsDNA 定量试剂是以0.1-1mL的浓缩液形式保存在DMSO中。实验当天，配制2X PicoGreen试剂的操作溶液，用1x TE按1:200的比例稀释浓缩液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH7.5）。如果要准备足够的操作溶液测定 20 个样品，可在 20mL 1x TE 中加入100μL PicoGreen dsDNA定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。PicoGreen 试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
二：实验方法
1：标准品工作液的配制
小牛胸腺嘧啶DNA干粉，加入1mL双蒸水，配制成1mg∕mL的标准品工作液。
2：染料工作液的配置
6 uL PicoGreen加入1mL TE(注意：用1×TE将PicoGreen稀释200倍，现用现配，注意避光)。
3：标准品工作液稀释
1）母液稀释：取10ul（1mg/mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成10ug/mL，取10ul（10ug/mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成100ng/mL。
2）倍比稀释：取800ul（100ng/mL）的标准品工作液加入到200ul TE溶液中，浓度达到80ng/mL（药典规定：荧光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范围线性较好， 该法DNA检出限为0.3 ng/ml），取500ul（80ng/mL）的标准品工作液加入到500ul TE溶液中，浓度稀释到40ng/mL；依次倍比稀释，配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的标准品溶液。
3）标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100ul混匀，避光室温放置5min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank，测定样品和空白对照的荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/ml）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。
4）测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA 浓度的标准曲线。
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产品特点：
优点：
该方法可以测定来源于任何表达宿主样品中的双链DNA。
可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
远远超出传统紫外A260的检测方法和Hoechst33258的灵敏度。
较高浓度的盐，尿素，乙醇，氯仿，去垢剂，蛋白或琼脂糖对测定无影响。
在等摩尔浓度 ssDNA 和 RNA 存在的条件下测定 dsDNA，其影响很小。
该方法可以测定来源于任何表达宿主样品中的双链DNA。
可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
远远超出传统紫外A260的检测方法和Hoechst33258的灵敏度。
较高浓度的盐，尿素，乙醇，氯仿，去垢剂，蛋白或琼脂糖对测定无影响。
在等摩尔浓度 ssDNA 和 RNA 存在的条件下测定 dsDNA，其影响很小。
原理：
PicoGreen与DNA双链结合后才发出的荧光，无DNA不发荧光；所发荧光与DNA浓度成正比。在2010年《中国药典》中提出，PicoGreen定量DNA的方法检出限约0.3ng/ml，DNA含量在1.25-80ng/mL范围时线性较好(R2>0.99).
保存条件：
4℃，12个月
自备试剂：
微型荧光计
10×10mm 比色杯
微量检测皿适配器
小牛胸腺嘧啶DNA
PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒，1mL 单位量的试剂浓缩液足够 2mL体积的200次测定。
10×10mm 比色杯
微量检测皿适配器
小牛胸腺嘧啶DNA
PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒，1mL 单位量的试剂浓缩液足够 2mL体积的200次测定。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
