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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | EdU细胞增殖流式检测试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | EdU Cell Proliferation Flow Cytometry Kit | ||||
| 别名: | EdU细胞增殖流式检测试剂盒 EdU Cell Proliferation Flow Cytometry Kit | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。EdU (5-乙炔基-2′-脱氧尿苷)是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)掺入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与荧光染料的特异性共轭反应，把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面，这样可以进行高效快速的检测出DNA复制活性，此技术广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复等方面的研究。
传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性、抗原修复、抗原抗体过夜孵育等复杂繁琐的操作步骤。而EdU检测方法不需要剧烈的DNA变性，只需温和的细胞固定化和透化处理，能够较好地保护细胞形态、DNA 整体结构及细胞内抗原识别位点，操作步骤更加快速、灵敏和准确。EdU与胸腺嘧啶(T)结构非常相似，大小却只有BrdU抗体的1/500,很容易在细胞内扩散，无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更快速便捷地反映DNA 复制活性。
传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性、抗原修复、抗原抗体过夜孵育等复杂繁琐的操作步骤。而EdU检测方法不需要剧烈的DNA变性，只需温和的细胞固定化和透化处理，能够较好地保护细胞形态、DNA 整体结构及细胞内抗原识别位点，操作步骤更加快速、灵敏和准确。EdU与胸腺嘧啶(T)结构非常相似，大小却只有BrdU抗体的1/500,很容易在细胞内扩散，无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更快速便捷地反映DNA 复制活性。
操作步骤：
细胞培养：将细胞接种于孔板中(以下溶液加入量是以6孔板为例),培养至正常生长阶段。
药物处理：根据实验需要进行各种细胞处理。
一：EdU 标记
1：设置1个不加EdU标记培养基的NC对照组，以便进行流式检测数据的背景分析。
2：将细胞培养基与EdU溶液按照500:1 的比例混合，制成2×EdU 标记培养基。
3：提前将2×EdU标记培养基预热，然后将500μL2×EdU 标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得6孔板中每孔1mL 1×EdU溶液。步骤不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度；配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。
4：孵育细胞2 h, 弃培养基。培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态；大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2h 的孵育时间。
5：将细胞收集至流式管中，1000rpm离心5min, 用枪头吸弃上清。如贴壁细胞，请先消化收集；离心转速可按特定细胞培养经验进行设置。
6：以1×PBS 清洗细胞，1000rpm离心5min, 用枪头吸弃上清。
二：细胞的固定和通透
1：每管加入1mL4% 多聚甲醛细胞固定液固定15-30 min,1000rpm离心5min, 弃固定液。
2：每管加入2mL 2mg/mL甘氨酸，摇床孵育5min, 以中和过量的多聚甲醛。
3：1000rpm离心5 min, 弃甘氨酸溶液，每管加入2mL PBS洗液清洗，1000 rpm离心 5min, 弃上清。
4：每管加入1mL 0.5%Triton X-100细胞通透液，室温通透10 min,1000rpm 离心 5 min, 弃细胞通透溶液。
5：每管加入2mL PBS洗液，室温清洗5min,1000rpm离心5min, 吸弃上清。
三：EDU染色
1：通过用10:1去离子水稀释反应缓冲液，进行配制1×反应缓冲液。
2：按照溶解200 mg 缓冲添加剂溶于1 mL 去离子水的比例称取适量的粉末进行溶解，即为可用的缓冲添加剂的浓度，建议现用现配。缓冲添加剂为白色粉末，较难准确称量，称量范围可稍微放宽，但是不应超过±20%,且该粉末较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。
3：按照图1的表格进行染色反应液的配制。
4：每管加入配置好的检测混合液，体积以覆盖细胞为宜，充分重悬细胞，避光、室温孵育10-30 min。
5：1000rpm 离心5min, 吸弃染色反应液，每管加入2mL0.5%Triton X-100细胞渗透液清洗2次，每次10 min;离心弃细胞渗透液，用500uL PBS重悬细胞。
四：DNA染色
1：将 Hoechst 33342用PBS 溶液1:1000进行稀释得到1×染色液。
2：每管加入1×Hoechst 染色液，以覆盖细胞为宜，室温避光孵育10-15 min 后，弃染色液。
3：加入500μL PBS重悬细胞。
图1:
药物处理：根据实验需要进行各种细胞处理。
一：EdU 标记
1：设置1个不加EdU标记培养基的NC对照组，以便进行流式检测数据的背景分析。
2：将细胞培养基与EdU溶液按照500:1 的比例混合，制成2×EdU 标记培养基。
3：提前将2×EdU标记培养基预热，然后将500μL2×EdU 标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得6孔板中每孔1mL 1×EdU溶液。步骤不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度；配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。
4：孵育细胞2 h, 弃培养基。培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态；大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2h 的孵育时间。
5：将细胞收集至流式管中，1000rpm离心5min, 用枪头吸弃上清。如贴壁细胞，请先消化收集；离心转速可按特定细胞培养经验进行设置。
6：以1×PBS 清洗细胞，1000rpm离心5min, 用枪头吸弃上清。
二：细胞的固定和通透
1：每管加入1mL4% 多聚甲醛细胞固定液固定15-30 min,1000rpm离心5min, 弃固定液。
2：每管加入2mL 2mg/mL甘氨酸，摇床孵育5min, 以中和过量的多聚甲醛。
3：1000rpm离心5 min, 弃甘氨酸溶液，每管加入2mL PBS洗液清洗，1000 rpm离心 5min, 弃上清。
4：每管加入1mL 0.5%Triton X-100细胞通透液，室温通透10 min,1000rpm 离心 5 min, 弃细胞通透溶液。
5：每管加入2mL PBS洗液，室温清洗5min,1000rpm离心5min, 吸弃上清。
三：EDU染色
1：通过用10:1去离子水稀释反应缓冲液，进行配制1×反应缓冲液。
2：按照溶解200 mg 缓冲添加剂溶于1 mL 去离子水的比例称取适量的粉末进行溶解，即为可用的缓冲添加剂的浓度，建议现用现配。缓冲添加剂为白色粉末，较难准确称量，称量范围可稍微放宽，但是不应超过±20%,且该粉末较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。
3：按照图1的表格进行染色反应液的配制。
4：每管加入配置好的检测混合液，体积以覆盖细胞为宜，充分重悬细胞，避光、室温孵育10-30 min。
5：1000rpm 离心5min, 吸弃染色反应液，每管加入2mL0.5%Triton X-100细胞渗透液清洗2次，每次10 min;离心弃细胞渗透液，用500uL PBS重悬细胞。
四：DNA染色
1：将 Hoechst 33342用PBS 溶液1:1000进行稀释得到1×染色液。
2：每管加入1×Hoechst 染色液，以覆盖细胞为宜，室温避光孵育10-15 min 后，弃染色液。
3：加入500μL PBS重悬细胞。
图1:
| 染色反应液组分 | 500μL | 1mL | 2mL | 5mL |
| 1X反应缓冲液 | 430μL | 860μL | 1.8 mL | 4.3 mL |
| 催化剂溶液 | 20μL | 40μL | 80μL | 200μL |
| TAMRA红色荧光溶液 | 1.2μL | 2.5μL | 5μL | 12.5μL |
| 缓冲添加剂 | 50μL | 100μL | 200μL | 500μL |
组分：
| 组分 | 规格(20 T) |
| A：EdU溶液 | 80μL |
| B：反应缓冲液 | 2mL |
| C：催化剂溶液 | 80μL |
| D：TAMRA红色荧光溶液 | 50μL |
| E：缓冲添加剂 | 400mg |
| F：Hoechst 33342 | 4μL |
保存条件：
4℃ 12个月
注意事项：
1：可以根据实验需要进行细胞表面或细胞内抗原的抗体染色。染色完的样品上机检测时，根据使用的 染料选择合适的通道检测。
2：建议染色完成后立即进行流式检测；如果条件限制，请于4℃条件下避光湿润保存3天之内完成检测。
3：检测细胞数量建议尽量能达到107级，若细胞数量较少，检测的细胞数量可调整为106起始进行实验。
4：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2：建议染色完成后立即进行流式检测；如果条件限制，请于4℃条件下避光湿润保存3天之内完成检测。
3：检测细胞数量建议尽量能达到107级，若细胞数量较少，检测的细胞数量可调整为106起始进行实验。
4：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
