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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | 超氧阴离子自由基检测试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | |||||
| 别名: | 超氧阴离子含量检测试剂盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交联或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。生物体内的分子氧可以经过单电子还原转变为超氧阴离子自由基(O2-)，O2-既可以直接作用于蛋白质和核酸等大分子，也可以衍生为羟自由基、单线态氧、过氧化氢及脂质过氧物自由基等对细胞结构和功能具有破坏作用的活性氧。
超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)又称超氧阴离子产生速率检测试剂盒，其检测原理是在酸性条件下，2份O2-与羟胺反应生成1份NO2-，NO2-在对氨基苯磺酸和萘胺的作用下反应生成粉红色的偶氮物质，以分光光度计测定530nm处吸光度，在一定范围内颜色深浅与O2-成正比，根据A530及NO2-和O2-的相关反应中物质的量的关系，可算出样品中O2-的浓度，主要用于测定植物组织中的超氧阴离子自由基含量或超氧阴离子的产生速率。
超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)又称超氧阴离子产生速率检测试剂盒，其检测原理是在酸性条件下，2份O2-与羟胺反应生成1份NO2-，NO2-在对氨基苯磺酸和萘胺的作用下反应生成粉红色的偶氮物质，以分光光度计测定530nm处吸光度，在一定范围内颜色深浅与O2-成正比，根据A530及NO2-和O2-的相关反应中物质的量的关系，可算出样品中O2-的浓度，主要用于测定植物组织中的超氧阴离子自由基含量或超氧阴离子的产生速率。
操作步骤：
1、准备样品：
①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取1~1.5g，加入2ml预冷的O2- Lysis Buffer后冰浴条件下匀浆或研磨，4℃ 10000g离心10min，上清液即为超氧阴离子自由基提取液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，4℃保存，用于超氧阴离子自由基的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的超氧阴离子自由基，可以使用O2- Lysis Buffer进行恰当的稀释。
2、配制系列NO2-标准溶液：取出NO2-标准(1mM)恢复至室温后，以NO2-标准(1mM)按下表继续稀释：
3、3、O2-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的超氧阴离子自由基浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
4、O2-测定：以空白调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定标准管、测定管530nm处吸光度(即为A标准、A测定)。
计算公式:
以系列NO2-标准(1～6号孔)含量(μM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定孔的吸光度进而计算NO2-含量。根据如下公式计算具体样品中超氧阴离子自由基(O2-)的含量：
植物组织样品O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS)
血清、尿液等样品O2-(μM/ml)=2×n×N/VS
超氧阴离子的产生速率的定义：每分钟每克鲜重组织产生的超氧阴离子的物质的量，计算公式如下：
超氧阴离子产生速率【μmol/(min*g)】=2×n×VT/(W×t×VS)
测得样品中蛋白质含量后，可用下面公式表示：
超氧阴离子产生速率【μmol/(min*mg)】=2×n×VT/(m×t×VS)
式中：2=NO2-与O2-间的化学计量数
n=从标准曲线上查得的NO2-含量(μM)
VT=超氧阴离子自由基提取液总体积(ml)
N=样品稀释倍数
W=样品鲜重(g)
m=样品中蛋白质含量(mg)
t=样品与羟胺的反应时间(min)=20
VS=测定时加入提取液体积(ml)
标准曲线制作：
测定NO2-标准10、20、40、60、80、100、120、140、160、180、200μM在530nm的吸光度，据此做出其标准曲线如下，根据结果可以看出NO2-标准在160μM以上时，OD值会有偏差，因此样品的O2-应小于320μM。
曲线图请参考说明书。
①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取1~1.5g，加入2ml预冷的O2- Lysis Buffer后冰浴条件下匀浆或研磨，4℃ 10000g离心10min，上清液即为超氧阴离子自由基提取液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，4℃保存，用于超氧阴离子自由基的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的超氧阴离子自由基，可以使用O2- Lysis Buffer进行恰当的稀释。
2、配制系列NO2-标准溶液：取出NO2-标准(1mM)恢复至室温后，以NO2-标准(1mM)按下表继续稀释：
| 加入物(μl) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| NO2-标准(1mM) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
| 蒸馏水 | 0.99 | 0.98 | 0.97 | 0.96 | 0.95 | 0.94 |
| NO2-含量(μM) | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 |
| 加入物(ml) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
| 蒸馏水 | 1 | - | - |
| 系列NO2-标准(1~6号) | - | 1 | - |
| 待测样品 | - | - | 0.25 |
| O2- Lysis Buffer | - | - | 0.25 |
| 羟胺溶液 | - | - | 0.5 |
| 混匀，25℃水浴孵育20min。 | |||
| 氨基苯磺酸显色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 萘胺显色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 混匀，30℃水浴孵育30min。 | |||
计算公式:
以系列NO2-标准(1～6号孔)含量(μM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定孔的吸光度进而计算NO2-含量。根据如下公式计算具体样品中超氧阴离子自由基(O2-)的含量：
植物组织样品O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS)
血清、尿液等样品O2-(μM/ml)=2×n×N/VS
超氧阴离子的产生速率的定义：每分钟每克鲜重组织产生的超氧阴离子的物质的量，计算公式如下：
超氧阴离子产生速率【μmol/(min*g)】=2×n×VT/(W×t×VS)
测得样品中蛋白质含量后，可用下面公式表示：
超氧阴离子产生速率【μmol/(min*mg)】=2×n×VT/(m×t×VS)
式中：2=NO2-与O2-间的化学计量数
n=从标准曲线上查得的NO2-含量(μM)
VT=超氧阴离子自由基提取液总体积(ml)
N=样品稀释倍数
W=样品鲜重(g)
m=样品中蛋白质含量(mg)
t=样品与羟胺的反应时间(min)=20
VS=测定时加入提取液体积(ml)
标准曲线制作：
测定NO2-标准10、20、40、60、80、100、120、140、160、180、200μM在530nm的吸光度，据此做出其标准曲线如下，根据结果可以看出NO2-标准在160μM以上时，OD值会有偏差，因此样品的O2-应小于320μM。
曲线图请参考说明书。
自备材料：
1、实验材料：植物组织(大豆、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本、蒸馏水等
2、研钵或匀浆器、离心管或试管、低温离心机、恒温箱或水浴锅、分光光度计、比色杯
2、研钵或匀浆器、离心管或试管、低温离心机、恒温箱或水浴锅、分光光度计、比色杯
组分：
| 组分名称 | PS1961-50T | Storage |
| 试剂(A): NO2-标准(1mM) | 1ml | 4℃ 避光 |
| 试剂(B): O2- Lysis Buffer | 125ml | RT |
| 试剂(C): 羟胺溶液 | 30ml | 4℃ |
| 试剂(D): 氨基苯磺酸显色液 | 30ml | 4℃ 避光 |
| 试剂(E): 萘胺显色液 | 30ml | 4℃ 避光 |
保存条件：
4℃ 避光 12个月
注意事项：
1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。
2、如果样品中含有较多的叶绿素，会干扰测定结果，可在加入羟胺溶液25℃水浴孵育20min后用等体积乙醚或三氯甲烷萃取叶绿素，再行显色反应。
3、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。
4、所测样本的浓度过高，应用O2- Lysis Buffer稀释样品后重新测定。
5、氨基苯磺酸显色液和萘胺显色液有强烈的刺激性，尽量在通风条件好的地方操作，用后需拧紧瓶盖，避免挥发。
6、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、以上信息仅做参考交流之用。
2、如果样品中含有较多的叶绿素，会干扰测定结果，可在加入羟胺溶液25℃水浴孵育20min后用等体积乙醚或三氯甲烷萃取叶绿素，再行显色反应。
3、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。
4、所测样本的浓度过高，应用O2- Lysis Buffer稀释样品后重新测定。
5、氨基苯磺酸显色液和萘胺显色液有强烈的刺激性，尽量在通风条件好的地方操作，用后需拧紧瓶盖，避免挥发。
6、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、以上信息仅做参考交流之用。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
