.png)
（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | CAT Activity Assay Kit | ||||
| 别名: | 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒 CAT Activity Assay Kit | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD，CAT能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)检测原理是血清或血浆等样品H2O2在240nm处有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过H2O2，使待测溶液吸光度随反应时间而减少，通过紫外酶标仪测定240nm处吸光度，根据测定吸光度的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性，主要用于测定植物组织、血清、血浆等样本中过氧化氢酶的活性，紫外法又称紫外分光光度计法或紫外吸收法，该酶的检测对于研究植物代谢强度及抗旱、抗病能力有一定的价值。
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)检测原理是血清或血浆等样品H2O2在240nm处有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过H2O2，使待测溶液吸光度随反应时间而减少，通过紫外酶标仪测定240nm处吸光度，根据测定吸光度的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性，主要用于测定植物组织、血清、血浆等样本中过氧化氢酶的活性，紫外法又称紫外分光光度计法或紫外吸收法，该酶的检测对于研究植物代谢强度及抗旱、抗病能力有一定的价值。
操作步骤：
1、配制CAT Assay Buffer工作液：按 CAT Assay Buffer(2.5×)：蒸馏水=1：1.5的比例稀释，即获得CAT Assay Buffer工作液，4℃预冷待用。
2、配制100mM H2O2基液：该试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M，由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度，把浓度约为1M的H2O2基液用CAT Assay Buffer工作液稀释100倍，使H2O2浓度约为10mM；分光光度计测定A240(一般情况下新配制的10mM H2O2基液A240在0.45左右，经过3个月以后A240在0.42左右)，H2O2浓度(mM)=22.94×A240。从而计算出该试剂盒提供的H2O2基液中H2O2的实际浓度，然后根据实际的H2O2浓度，配制100mM H2O2基液。
3、准备样品：
①植物、动物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织(或动物组织)，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按0.5g样品：2ml CAT Assay Buffer工作液的比例，加入预冷的CAT Assay buffer工作液后匀浆或研磨，转移至15ml离心管，再用CAT Assay Buffer工作液冲洗研钵或匀浆器，合并冲洗液至该离心管，补加CAT Assay Buffer工作液至10ml，混匀，4℃冰箱中静置10min，转移离心管上部的清液至新的离心管，4℃ 1200 r/min离心30min，上清液即为过氧化氢酶粗提液，4℃保存备用，用于CAT的测定。 ②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，亦可4℃短期保存，用于CAT的测定。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的CAT，可用CAT Assay Buffer工作液稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
4、CAT加样：取96孔板，按照下表设置空白孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的测定最好设置平行复测孔。
5、CAT测定：加入100mM H2O2基液24μl，每加完一孔立即计时，亦可用排枪同时加样，以避免误差；蒸馏水调零，酶标仪测定240nm处各孔吸光度，每隔1min读数1次，共测4次，待全部测定完毕后，计算酶活力。
计算公式:
CAT活性单位定义：在25℃ 1min A240减少0.1的过氧化氢酶量为一个CAT酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的CAT活性。
植物、动物组织中CAT活力[U/(g·min)]=(△A240×VT×N)/(0.1×VS×t×W)
血清、血浆、尿液中CAT活力[U/(ml·min)]=(△A240×N)/(0.1×VS×t)
式中：△A240=A空白-(A测定Ⅰ+A测定Ⅱ)/2
A空白=空白的吸光度
A测定=待测样品最后比较稳定的吸光度
VT=提取酶液总体积(ml)
N=待测样品检测前的稀释倍数
Vs=测定时所用样品体积(ml)
t=加H2O2基液到最后一次读数的反应时间(min)
W=样品新鲜质量(g)
0.1=A240下降0.1时的一个酶活力单位
2、配制100mM H2O2基液：该试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M，由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度，把浓度约为1M的H2O2基液用CAT Assay Buffer工作液稀释100倍，使H2O2浓度约为10mM；分光光度计测定A240(一般情况下新配制的10mM H2O2基液A240在0.45左右，经过3个月以后A240在0.42左右)，H2O2浓度(mM)=22.94×A240。从而计算出该试剂盒提供的H2O2基液中H2O2的实际浓度，然后根据实际的H2O2浓度，配制100mM H2O2基液。
3、准备样品：
①植物、动物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织(或动物组织)，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按0.5g样品：2ml CAT Assay Buffer工作液的比例，加入预冷的CAT Assay buffer工作液后匀浆或研磨，转移至15ml离心管，再用CAT Assay Buffer工作液冲洗研钵或匀浆器，合并冲洗液至该离心管，补加CAT Assay Buffer工作液至10ml，混匀，4℃冰箱中静置10min，转移离心管上部的清液至新的离心管，4℃ 1200 r/min离心30min，上清液即为过氧化氢酶粗提液，4℃保存备用，用于CAT的测定。 ②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，亦可4℃短期保存，用于CAT的测定。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的CAT，可用CAT Assay Buffer工作液稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
4、CAT加样：取96孔板，按照下表设置空白孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的测定最好设置平行复测孔。
| 加入物(μl) | 空白管 | 测定孔Ⅰ | 测定孔Ⅱ |
| CAT Assay Buffer工作液 | 120 | 120 | 120 |
| 待测样品(或提取液) | 16 | 16 | 16 |
| 蒸馏水 | 80 | 80 | 80 |
| 单独取空白管煮沸1min，冷却至25℃。将其余测定管预热至25℃。 | |||
计算公式:
CAT活性单位定义：在25℃ 1min A240减少0.1的过氧化氢酶量为一个CAT酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的CAT活性。
植物、动物组织中CAT活力[U/(g·min)]=(△A240×VT×N)/(0.1×VS×t×W)
血清、血浆、尿液中CAT活力[U/(ml·min)]=(△A240×N)/(0.1×VS×t)
式中：△A240=A空白-(A测定Ⅰ+A测定Ⅱ)/2
A空白=空白的吸光度
A测定=待测样品最后比较稳定的吸光度
VT=提取酶液总体积(ml)
N=待测样品检测前的稀释倍数
Vs=测定时所用样品体积(ml)
t=加H2O2基液到最后一次读数的反应时间(min)
W=样品新鲜质量(g)
0.1=A240下降0.1时的一个酶活力单位
自备材料：
1、蒸馏水、生理盐水
2、研钵或匀浆器、离心管、离心机、水浴锅或恒温箱、96孔UV板、全波长酶标仪
2、研钵或匀浆器、离心管、离心机、水浴锅或恒温箱、96孔UV板、全波长酶标仪
组分：
| 组分名称 | PS1922-100T | Storage |
| 试剂(A): H2O2基液 | 2×1ml | 4℃ 避光 |
| 试剂(B): CAT Assay Buffer(2.5×) | 2×250ml | 4℃ |
保存条件：
4℃ 避光 12个月
注意事项：
1、待测样品中不应含有CAT抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、400nm以下吸光度值的测定应选用石英比色杯或UV酶标板。
3、CAT Assay Buffer如出现沉淀或絮状物，可用50℃左右温水助溶，仍有絮状物应弃用。
4、完整的红细胞以及未稀释的溶血液中的过氧化氢酶置于4℃ 1周仍然很稳定，稀释后的溶血液中CAT容易失活。
5、尽量避免冰冻样品造成溶血，否则过氧化氢酶活性会下降10%～15%。
6、血清样品3天内室温下活性下降64.7%，4℃下下降10.5%，-20℃保存30天活性仅下降3.5%，因此待测样品均应-20℃或-70℃保存。
7、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
9、以上信息仅做参考交流之用。
2、400nm以下吸光度值的测定应选用石英比色杯或UV酶标板。
3、CAT Assay Buffer如出现沉淀或絮状物，可用50℃左右温水助溶，仍有絮状物应弃用。
4、完整的红细胞以及未稀释的溶血液中的过氧化氢酶置于4℃ 1周仍然很稳定，稀释后的溶血液中CAT容易失活。
5、尽量避免冰冻样品造成溶血，否则过氧化氢酶活性会下降10%～15%。
6、血清样品3天内室温下活性下降64.7%，4℃下下降10.5%，-20℃保存30天活性仅下降3.5%，因此待测样品均应-20℃或-70℃保存。
7、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
9、以上信息仅做参考交流之用。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
(2).jpg)
体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
