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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)检测试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | 4CL Assay Kit | ||||
| 别名: | 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)检测试剂盒 4CL Assay Kit | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
肉桂酸-4-羟基化酶是催化桂皮酸形成咖啡酸、香豆酸的酶，该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量、提高其品质提供依据。
肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)检测试剂盒(肉桂酸比色法)检测原理是以肉桂酸作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计或酶标仪290nm处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的肉桂酸-4-羟基化酶活性，尤其适用于检测水果中肉桂酸-4-羟基化酶活性。
肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)检测试剂盒(肉桂酸比色法)检测原理是以肉桂酸作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计或酶标仪290nm处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的肉桂酸-4-羟基化酶活性，尤其适用于检测水果中肉桂酸-4-羟基化酶活性。
操作步骤：
1、准备样品：
①植物样品：取0.5g植物组织或水果中层果肉，加入2ml C4H Lysis Buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，4℃ 10000 r/min离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，4℃ 10000g离心15~20min，取上清液，-20℃冻存，用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的肉桂酸-4-羟基化酶，可以使用蒸馏水或C4H Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。
2、配制NADPH工作液：取1支NADPH加入1ml蒸馏水，充分溶解，即为NADPH工作液。该NADPH工作液4℃保存1周，-20℃保存2个月。
3、C4H加样：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的C4H活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
4、C4H测定：以对照管为对照(调零)，比色杯光径1cm，立即以分光光度计测定290nm处测定管的吸光度(记为A测定0)，37℃准确孵育1h。立即加入0.1ml C4H终止液终止反应，用C4H碱性基液调节pH至约11(如用pH计检测体积过小，亦可考虑用pH试纸，如无条件可省略该步骤)，以对照管为对照(调零)，比色杯光径1cm，立即以分光光度计测定290nm处测定管的吸光度(记为A测定1)。
注意：加入C4H终止液终止反应不是必须步骤，可37℃准确孵育1h后直接以对照管为对照(调零)，比色杯光径1cm，立即以分光光度计测定290nm处测定管的吸光度(记为A测定1)；用酶标仪检测，体积可相应缩小，其余同分光光度计检测操作。
计算公式:
C4H活性单位的定义：在该实验条件下，每1h吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。
组织样品C4H[U/(g·h) ]={(A测定1-A测定0)×VT}/(W×VS×0.01×t)
液体样品C4H[U/(ml·h) ]=(A测定1-A测定0)/( VS×0.01×t)
式中：A测定1=孵育1h后测定管的吸光度
A测定0=加入C4H Assay buffer后测定管的吸光度
W=组织样品的重量(g)
VT=提取酶液的总体积(ml)
VS=测定时所用酶液体积(ml)
t=反应时间(h)=1
①植物样品：取0.5g植物组织或水果中层果肉，加入2ml C4H Lysis Buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，4℃ 10000 r/min离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，4℃ 10000g离心15~20min，取上清液，-20℃冻存，用于肉桂酸-4-羟基化酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的肉桂酸-4-羟基化酶，可以使用蒸馏水或C4H Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。
2、配制NADPH工作液：取1支NADPH加入1ml蒸馏水，充分溶解，即为NADPH工作液。该NADPH工作液4℃保存1周，-20℃保存2个月。
3、C4H加样：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的C4H活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
| 加入物(ml) | 对照管 | 测定管 |
| 蒸馏水 | 1.69 | 1.64 |
| 待测样品 | 0.05 | 0.05 |
| C4H Lysis Buffer | 0.25 | 0.25 |
| NADPH工作液 | 0.01 | 0.01 |
| C4H Assay Buffer | - | 0.05 |
注意：加入C4H终止液终止反应不是必须步骤，可37℃准确孵育1h后直接以对照管为对照(调零)，比色杯光径1cm，立即以分光光度计测定290nm处测定管的吸光度(记为A测定1)；用酶标仪检测，体积可相应缩小，其余同分光光度计检测操作。
计算公式:
C4H活性单位的定义：在该实验条件下，每1h吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。
组织样品C4H[U/(g·h) ]={(A测定1-A测定0)×VT}/(W×VS×0.01×t)
液体样品C4H[U/(ml·h) ]=(A测定1-A测定0)/( VS×0.01×t)
式中：A测定1=孵育1h后测定管的吸光度
A测定0=加入C4H Assay buffer后测定管的吸光度
W=组织样品的重量(g)
VT=提取酶液的总体积(ml)
VS=测定时所用酶液体积(ml)
t=反应时间(h)=1
自备材料：
1、蒸馏水
2、研钵或匀浆器、离心管或试管、低温离心机、水浴锅、比色杯、分光光度计
2、研钵或匀浆器、离心管或试管、低温离心机、水浴锅、比色杯、分光光度计
组分：
| 组分名称 | PS1888-60T | Storage |
| 试剂(A): C4H Lysis Buffer | 250mL | 4℃ 避光 |
| 试剂(B): C4H Assay Buffer | 5mL | 4℃ 避光 |
| 试剂(C): NADPH | 1支 | -20℃ |
| 试剂(D): C4H终止液(备选) | 10ml | RT |
| 试剂(E): C4H碱性基液(备选) | 10ml | RT |
保存条件：
—20℃ 避光 6个月
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、获得上清液为C4H酶液，应尽快检测，亦可-20℃保存。
3、加入C4H终止液终止反应后，最好采用C4H碱性基液调节pH至11左右，以便检测更为准确，亦可考虑用pH试纸，如无条件可省略该步骤。
4、C4H碱性基液具有一定腐蚀性，请小心操作。
5、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但本试剂盒不推荐用酶标仪检测，如需酶标仪检测每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
6、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、以上信息仅做参考交流之用。
2、获得上清液为C4H酶液，应尽快检测，亦可-20℃保存。
3、加入C4H终止液终止反应后，最好采用C4H碱性基液调节pH至11左右，以便检测更为准确，亦可考虑用pH试纸，如无条件可省略该步骤。
4、C4H碱性基液具有一定腐蚀性，请小心操作。
5、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但本试剂盒不推荐用酶标仪检测，如需酶标仪检测每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
6、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、以上信息仅做参考交流之用。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
