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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | Calcein AM /PI试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
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| 英文名称: | Calcein AM /PI Kit | ||||
| CAS No: | 分子式: | 分子量: | |||
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产品简介：
钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI) 溶液，分别对活细胞和死细胞染色，可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。Calcein-AM的乙酸甲基酯亲脂性很高，使其可透过细胞膜。尽管Calcein-AM本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，Calcein-AM能脱去AM基，产生的Calcein能发出强绿色荧光 (激发: 490 nm，发射: 515 nm)。因此Calcein-AM仅对活细胞染色。另一方面，作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光 (激发: 535 nm，发射: 617 nm)。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议个别确定Calcein-AM和PI的合适浓度。
操作步骤：
用荧光显微镜观察细胞形态，以HeLa细胞染色为例，请注意不同的细胞种类、不同浓度，有不同的观察条件。根据细胞条件，摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。
一：染色溶液的配制
1：将Calcein-AM储备液和PI储备液平衡到室温。
2：分别加2.5 µl Calcein-AM原液和12.5 µl PI原液至5 mL PBS（pH=7.4）中配制成染色工作液。染色工作液中Calcein-AM的浓度为2 µmol/L，PI的浓度约为5 µmol/L。
二：细胞染色
1：染色HeLa细胞等贴壁细胞时，先用Trypsin-EDTA等消化细胞，制备成细胞悬液。
2：将细胞悬液离心3分钟 (1,000 rpm)。
3：去除上清液，加入PBS缓冲液，细胞数量调整至10⁵-10⁶个/ml。再用移液器充分混匀。
4：由于培养基中的血清等含有酯酶，Calcein-AM遇水会分解，会导致空白上升，所以需要离心数次，用PBS洗涤数次直到完全洗净。
5：将200 µl细胞悬液移至小试管中，加入100 µl染色工作液，在37℃下孵育15分钟。
6：在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。
7：在荧光显微镜下，先用490±10 nm波长激发，观察黄绿色的活细胞，还可以同时观察到红色的死细胞，然后用545 nm波长激发，能够看到红色的死细胞。
三：染色试剂的最佳浓度
Calcein-AM和PI最佳浓度根据细胞种类而定，通过以下的操作，可找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。
1：通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育10分钟或通过在70%乙醇中孵育30分钟制备死细胞。
2：用0.1-10 µM PI溶液对死细胞染色，以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。
3：用0.1-10 µM Calcein-AM溶液对死细胞染色，以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度。接着用该浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。
一：染色溶液的配制
1：将Calcein-AM储备液和PI储备液平衡到室温。
2：分别加2.5 µl Calcein-AM原液和12.5 µl PI原液至5 mL PBS（pH=7.4）中配制成染色工作液。染色工作液中Calcein-AM的浓度为2 µmol/L，PI的浓度约为5 µmol/L。
二：细胞染色
1：染色HeLa细胞等贴壁细胞时，先用Trypsin-EDTA等消化细胞，制备成细胞悬液。
2：将细胞悬液离心3分钟 (1,000 rpm)。
3：去除上清液，加入PBS缓冲液，细胞数量调整至10⁵-10⁶个/ml。再用移液器充分混匀。
4：由于培养基中的血清等含有酯酶，Calcein-AM遇水会分解，会导致空白上升，所以需要离心数次，用PBS洗涤数次直到完全洗净。
5：将200 µl细胞悬液移至小试管中，加入100 µl染色工作液，在37℃下孵育15分钟。
6：在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。
7：在荧光显微镜下，先用490±10 nm波长激发，观察黄绿色的活细胞，还可以同时观察到红色的死细胞，然后用545 nm波长激发，能够看到红色的死细胞。
三：染色试剂的最佳浓度
Calcein-AM和PI最佳浓度根据细胞种类而定，通过以下的操作，可找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。
1：通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育10分钟或通过在70%乙醇中孵育30分钟制备死细胞。
2：用0.1-10 µM PI溶液对死细胞染色，以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。
3：用0.1-10 µM Calcein-AM溶液对死细胞染色，以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度。接着用该浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。
组分：
500T：Calcein-AM(4mM)50uL in DMSO; PI (2mM) 150uL in water
100T：Calcein-AM(4mM)20uL in DMSO; PI (2mM) 60uL in water
100T：Calcein-AM(4mM)20uL in DMSO; PI (2mM) 60uL in water
保存条件：
-20° C,两年。
注意事项：
1：Calcein-AM的ester部位遇到湿气会分解，使用后请在-20度下密闭冷冻保存，防止水分进入。Calcein-AM储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。
2：使用时一定要带手套、眼罩、口罩。一旦接触到皮肤的话，迅速使用大量水清洗。
3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2：使用时一定要带手套、眼罩、口罩。一旦接触到皮肤的话，迅速使用大量水清洗。
3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
分析证书(COA)
Lot/Batch Number
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
