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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | 羟脯氨酸 (HYP)含量检测试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | Hydroxyproline(HYP)Content Assay Kit | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此 HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样本经酸水解产生游离的 HYP，进一步被氯胺 T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在 560nm 处有特征吸收峰。通过测定样本水解液 560nm 吸光值，可计算 HYP 含量。
最低检出限：0.057 μg/mL
线性范围：0.234-30 μg/mL
注：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
样本经酸水解产生游离的 HYP，进一步被氯胺 T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在 560nm 处有特征吸收峰。通过测定样本水解液 560nm 吸光值，可计算 HYP 含量。
最低检出限：0.057 μg/mL
线性范围：0.234-30 μg/mL
注：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
操作步骤：
一、样本处理
1：组织：称取约 0.2g 样本于 EP 管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。加入 2mL 的提取液，煮沸或110℃烘箱 2 至 6 小时消化至没有可见大的团块（缠封口膜，防止爆盖），冷却后用 NaOH 溶液（10mol/L 的大约需要 1mL）调节 pH 值至 6-8 范围内（不可过酸或过碱），再蒸馏水定容至 4mL。最后 16000rpm，25℃，离心 20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），取上清待测。
2：细菌/细胞：取 5×106个细菌/细胞，加入 1mL 的提取液，煮沸或 110℃烘箱 2 至 6 小时消化至透明状（缠封口膜，防止爆盖），冷却后用 NaOH 溶液（10mol/L 的大约需要 0.5mL）调节 pH 值至 6-8 范围内（不可过酸或过碱），蒸馏水定容至 2mL，16000rpm，25℃，离心 20min，取上清待测。
3：液体样本：称取 300μL 液体样本于 EP 管，加入 0.7mL 的提取液（若测定数值过小可调整二者比例），煮沸或 110℃烘箱 2 至 6 小时消化至没有可见大的团块（缠封口膜，防止爆盖），冷却后用 NaOH 溶液调节 pH 值至6-8 范围内（不可过酸或过碱），再蒸馏水定容至 2mL。最后 16000rpm，25℃，离心 20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），取上清待测。
注：提取过程中可能有黑色物质生成，若长时间不能消化，可能为碳化的物质，不影响实验。
二、测定步骤
1：分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2：将 0.5 mg/mL 羟脯氨酸标准品用蒸馏水稀释为30、15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234μg/mL 标准品。
3：标准品稀释表：
注：下述实验中每个标准管需 60µL 标准品（注意不要在此步骤直接检测吸光度）。
4：按下表进行操作：
计算公式:
羟脯氨酸含量的测定：
（1）按样本质量计算：
组织羟脯氨酸含量（µg/g 质量）= x×V 样本÷（W×V 样本÷V 组提）×F=4x÷W×F
（2）按样本蛋白浓度计算：
组织羟脯氨酸含量（µg/mg prot）= x×V 样本÷（Cpr×V 样本）×F =x÷Cpr×F
（3）按细菌或细胞数量计算：
细胞羟脯氨酸含量（µg/106 cell）= x×V 样本÷（N×V 样本÷V 胞提）×F =2x÷N×F
（4）按液体体积计算：
液体羟脯氨酸含量（µg/mL）= x×V 液提÷V 液体×F =6.67×x×F
V 样本：加入的样本体积，0.06mL；V 组提：组织提取液体积，4mL；V 胞提：细胞提取液体积，2mL；V 液提：液体提取液体积，2mL；V 液体：前处理中液体加入体积，0.3mL；W：样本质量，g；N：细胞数量，以 106为单位，百万个；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；F：稀释倍数。
标准曲线制作：
以标准品的浓度为 x 轴，∆A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到方程 y=kx+b。将∆A 测定带入方程得到 x（µg/mL）。
曲线图请参考说明书。
实验实例：
1：取 0.2g 小鼠皮肤进行样本处理，取上清后蒸馏水稀释 32 倍后按测定步骤操作，使用96孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.375-0.123=0.252，带入标准曲线 y=0.0344x+0.015，R2=0.9975，计算 x=6.89，按样本质量计算含量得：
组织羟脯氨酸含量（µg/g 质量）=4x÷W×32（稀释倍数）=4×6.89÷0.2×32=4409.6 µg/g 质量。
2：取 8×106个 HMC-1 细胞进行样本处理，取上清后按测定步骤操作，使用96孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.183-0.126=0.057，带入标准曲线 y=0.0344x+0.015，R2=0.9975，计算 x=1.22，按细胞数量计算含量得：
细胞羟脯氨酸含量（µg/106cell）=2x÷N=2×1.22÷8=0.305 µg/106cell。
3：取 300μL 牛血清进行样本处理，取上清后按测定步骤操作，使用96孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.194-0.123=0.071，带入标准曲线 y=0.0344x+0.015，R2=0.9975，计算 x=1.63，按液体体积计算含量得：
液体羟脯氨酸含量（µg/mL）=6.67×x=6.67×1.63=10.87 µg/mL。
1：组织：称取约 0.2g 样本于 EP 管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。加入 2mL 的提取液，煮沸或110℃烘箱 2 至 6 小时消化至没有可见大的团块（缠封口膜，防止爆盖），冷却后用 NaOH 溶液（10mol/L 的大约需要 1mL）调节 pH 值至 6-8 范围内（不可过酸或过碱），再蒸馏水定容至 4mL。最后 16000rpm，25℃，离心 20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），取上清待测。
2：细菌/细胞：取 5×106个细菌/细胞，加入 1mL 的提取液，煮沸或 110℃烘箱 2 至 6 小时消化至透明状（缠封口膜，防止爆盖），冷却后用 NaOH 溶液（10mol/L 的大约需要 0.5mL）调节 pH 值至 6-8 范围内（不可过酸或过碱），蒸馏水定容至 2mL，16000rpm，25℃，离心 20min，取上清待测。
3：液体样本：称取 300μL 液体样本于 EP 管，加入 0.7mL 的提取液（若测定数值过小可调整二者比例），煮沸或 110℃烘箱 2 至 6 小时消化至没有可见大的团块（缠封口膜，防止爆盖），冷却后用 NaOH 溶液调节 pH 值至6-8 范围内（不可过酸或过碱），再蒸馏水定容至 2mL。最后 16000rpm，25℃，离心 20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），取上清待测。
注：提取过程中可能有黑色物质生成，若长时间不能消化，可能为碳化的物质，不影响实验。
二、测定步骤
1：分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2：将 0.5 mg/mL 羟脯氨酸标准品用蒸馏水稀释为30、15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234μg/mL 标准品。
3：标准品稀释表：
| 序号 | 稀释前浓度（μg/mL） | 标准液体积（µL） | 蒸馏水体积（µL） | 稀释后浓度（μg/mL） |
| 1 | 500（即 0.5 mg/mL） | 60 | 940 | 30 |
| 2 | 30 | 500 | 500 | 15 |
| 3 | 15 | 500 | 500 | 7.5 |
| 4 | 7.5 | 500 | 500 | 3.75 |
| 5 | 3.75 | 500 | 500 | 1.875 |
| 6 | 1.875 | 500 | 500 | 0.938 |
| 7 | 0.938 | 500 | 500 | 0.469 |
| 8 | 0.469 | 500 | 500 | 0.234 |
4：按下表进行操作：
| 试剂名称 | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
| 样本（μL） | - | 60 | - |
| 标准品（μL） | - | - | 60 |
| 试剂一（μL） | 60 | 60 | 60 |
| 混匀，常温静置 20min。 | |||
| 试剂二（μL） | 60 | 60 | 60 |
| 蒸馏水（μL） | 180 | 120 | 120 |
| 混匀，60℃，水浴 20min，取出后常温静置 15 min，取 200µL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中检测 560nm下的吸光值，记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管，计算∆A 测定=A 测定管-A 空白管，∆A 标准=A标准管-A 空白管。标准曲线和空白管只需做 1-2 次。 | |||
计算公式:
羟脯氨酸含量的测定：
（1）按样本质量计算：
组织羟脯氨酸含量（µg/g 质量）= x×V 样本÷（W×V 样本÷V 组提）×F=4x÷W×F
（2）按样本蛋白浓度计算：
组织羟脯氨酸含量（µg/mg prot）= x×V 样本÷（Cpr×V 样本）×F =x÷Cpr×F
（3）按细菌或细胞数量计算：
细胞羟脯氨酸含量（µg/106 cell）= x×V 样本÷（N×V 样本÷V 胞提）×F =2x÷N×F
（4）按液体体积计算：
液体羟脯氨酸含量（µg/mL）= x×V 液提÷V 液体×F =6.67×x×F
V 样本：加入的样本体积，0.06mL；V 组提：组织提取液体积，4mL；V 胞提：细胞提取液体积，2mL；V 液提：液体提取液体积，2mL；V 液体：前处理中液体加入体积，0.3mL；W：样本质量，g；N：细胞数量，以 106为单位，百万个；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；F：稀释倍数。
标准曲线制作：
以标准品的浓度为 x 轴，∆A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到方程 y=kx+b。将∆A 测定带入方程得到 x（µg/mL）。
曲线图请参考说明书。
实验实例：
1：取 0.2g 小鼠皮肤进行样本处理，取上清后蒸馏水稀释 32 倍后按测定步骤操作，使用96孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.375-0.123=0.252，带入标准曲线 y=0.0344x+0.015，R2=0.9975，计算 x=6.89，按样本质量计算含量得：
组织羟脯氨酸含量（µg/g 质量）=4x÷W×32（稀释倍数）=4×6.89÷0.2×32=4409.6 µg/g 质量。
2：取 8×106个 HMC-1 细胞进行样本处理，取上清后按测定步骤操作，使用96孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.183-0.126=0.057，带入标准曲线 y=0.0344x+0.015，R2=0.9975，计算 x=1.22，按细胞数量计算含量得：
细胞羟脯氨酸含量（µg/106cell）=2x÷N=2×1.22÷8=0.305 µg/106cell。
3：取 300μL 牛血清进行样本处理，取上清后按测定步骤操作，使用96孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.194-0.123=0.071，带入标准曲线 y=0.0344x+0.015，R2=0.9975，计算 x=1.63，按液体体积计算含量得：
液体羟脯氨酸含量（µg/mL）=6.67×x=6.67×1.63=10.87 µg/mL。
自备材料：
天平、EP 管、离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、6mol/L 盐酸、氢氧化钠溶液和蒸馏水。
组分：
| 组分名称 | PS2110-100T | Storage |
| 提取液 | 自备试剂 | - |
| 试剂一 | 8 mL | 2-8℃ |
| 试剂二 | 8 mL | 2-8℃ |
| 标准品 | 0.5 mL | 2-8℃ |
| 96 孔板 | 96孔 | - |
| 封板膜 | 2张 | - |
1：提取液：自备 6 mol/L 盐酸溶液，大约需要 200mL，常温保存；试剂盒内提供一个 30mL 棕色空瓶，仅做分装使用，请自行标注试剂名称。
2：6 mol/L 盐酸提取液的配制：按浓盐酸（37%）和 H2O 的体积比是 1：1 进行配制。
3：标准品：0.5 mg/mL 羟脯氨酸标准品。
保存条件：
2-8℃，6个月。
注意事项：
1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者用蒸馏水稀释样本后再进行测定。
2、按样本蛋白浓度计算时，需单独提取样本中的蛋白质并测定。
3、试剂有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，防止吸入或与皮肤接触。
2、按样本蛋白浓度计算时，需单独提取样本中的蛋白质并测定。
3、试剂有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，防止吸入或与皮肤接触。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
(2).jpg)
体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
