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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | RiboGreen荧光染料 一键复制产品信息 | ||||
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| 英文名称: | |||||
| 别名: | RiboGreen荧光染料 | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
在分子生物学实验中，小量RNA的检测和定量是非常重要的一步，其中包括体外转录RNA的产量检测、Northern印迹分析前RNA浓度测定、S1核酸酶化验、核酶保护分析/cDNA文库构建、RT-PCR和差异显示PCR。
测量核酸浓度的常规方法是在260nm(A260)波长下测量核酸溶液的吸光值。这种方法的主要缺点是蛋白和游离核苷酸对光信号具有较大的干扰，无法区分DNA和RNA。在核酸制备中经常发生的污染会引起这种干扰。一般来说,这种测量方法(浓度为4µg/mLRNA中A260＝0.1)不够灵敏。而应用荧光核酸染料能够避免很多由于核酸污染引起的问题。
RiboGreen定量试剂，使研究人员能定量浓度低至1ng/mL的RNA(图1),灵敏度超过了溴化乙锭荧光分析200倍和A260方法1000倍。使用两种不同浓度的染料可测量的RNA浓度线性范围可达到2.5个数量级以上。使用单一浓度的RiboGreen试剂和推荐的操作方法，研究者能够定量检测浓度为25ng/mL到500ng/mL的RNA。稀释RiboGreen试剂10倍或者更多，浓度测量范围在1ng/mL和50ng/mL的RNA溶液。即使RNA溶液中有几种常见杂质存在时仍能保持线性关系。在选择性的分析RNA时，尽管DNA上连接了RiboGreen试剂，在前处理中仍可以使用DNA酶来去除混合样品中DNA。
RiboGreen定量试剂，使研究人员能定量浓度低至1ng/mL的RNA(图1),灵敏度超过了溴化乙锭荧光分析200倍和A260方法1000倍。使用两种不同浓度的染料可测量的RNA浓度线性范围可达到2.5个数量级以上。使用单一浓度的RiboGreen试剂和推荐的操作方法，研究者能够定量检测浓度为25ng/mL到500ng/mL的RNA。稀释RiboGreen试剂10倍或者更多，浓度测量范围在1ng/mL和50ng/mL的RNA溶液。即使RNA溶液中有几种常见杂质存在时仍能保持线性关系。在选择性的分析RNA时，尽管DNA上连接了RiboGreen试剂，在前处理中仍可以使用DNA酶来去除混合样品中DNA。
操作步骤：
在RiboGreenRNA定量检测中，为了获得完全的线性动力学范围，需要两种不同染料浓度。RiboGreenRNA定量检测试剂提供了不同浓度的工作溶液，分别可以检测高浓度(25ng/mL到500ng/mLRNA)和低浓度(1ng/mL到50ng/mLRNA)。
一、缓冲液制备
TE缓冲液(10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH7.5)用来稀释RiboGreen试剂和RNA样品，必须保证TE缓冲液没有受到核酸及核酸酶的污染。在处理和准备各种材料及试剂时应使用一次性手套。所有的溶液应该存放在灭菌过的一次性的塑料瓶或无核酸酶污染的玻璃瓶中。应使用无核酸酶污染的吸管。包含在RiboGreenRNA试剂盒中的20XTE缓冲液是无核酸及核酸酶污染的。缓冲液可以用无核酸酶污染的纯水来稀释20X浓缩TE缓冲液来获得1XTE工作液，无核酸酶纯水可通过蒸馏、用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)去离子获得，在37°C下孵育数小时并在15PSIinch下灭菌15分钟可以去除DEPC。
注:DEPC可能是一种致癌物质，应谨慎处理。含胺类物质，例如Tris，能够和DEPC快速反应，因此将此类物质加入到DEPC处理水中应在DEPC通过加热去除后再加入。加热去除DEPC对于阻止样品中RNA的羧化和羟基化也是很重要的。
二、试剂制备
实验当天，用1XTE缓冲液整数倍稀释RiboGreen浓缩液成2X工作液（DMSO包装贮存）。如果是高浓度检测，稀释200倍，例如：要准备足够测量20个样品的工作液（2mL体积），可加100µLRiboGreen到19.9mL1XTE中；如果是低浓度检测,稀释2000倍，例如：要准备足够测量20个样品的工作液（2mL体积），可加10µLRiboGreen到20.0mL1XTE中。试剂配制在灭菌过的一次性的聚丙烯塑料瓶中会优于在玻璃瓶中，因为玻璃表面可能会吸附试剂。因为RiboGreen试剂可能有光降解现象，用铝箔纸封口并放置在暗处可保护工作液。工作液配制好后尽快使用，在数小时内使用会取得最好的结果。
三、RNA标准曲线
1、在塑料瓶中用无核酸酶的1XTE配制浓度为2µg/mLRNA溶液。用比色杯在1cm长度通路下测量该RNA溶液在260nm(A260)下的基本吸光值，A260＝0.05相当于RNA浓度2µg/mL。RiboGreenRNA定量试剂盒包括16S和23S核糖体标准RNA，浓度为100µg/mL，可以用1XTE稀释50倍成为2µg/mL的工作液。例如，40µL的标准RNA用1.96mL的TE缓冲液稀释，足够制作标准曲线时使用。推荐使用与待测RNA类型相同的纯化RNA作为标准制作标准曲线。一般来说，等量的异源单链RNA能产生大致相等的荧光强度。在核苷、盐、尿素、乙醇、氯仿、去污剂、蛋白质和琼脂糖这些污染核酸试剂的复合物存在时，线性关系仍可保持。但荧光强度可能会受到影响。因此，制作标准曲线的RNA溶液和待测样品应该用相同的方法处理，使得样品和标样中杂质的含量水平相当。
2、制作高浓度标准曲线时，通过稀释2µg/mLRNA溶液配制一系列的2X终浓度RNA标准溶液至一次性玻璃容器或者无核酸酶的塑料管中，最后转移到小细胞管中。(见表1)
3、制作低浓度标准曲线时，通过稀释2µg/mLRNA溶液配制一系列的2X终浓度RNA标准溶液，至一次性玻璃容器或者无核酸酶的塑料管中，最后转移到小细胞管中。(见表2)
4、等体积混合2XRiboGreen试剂工作液和2XRNA标准溶液，高浓度工作液（200倍稀释）只能用于高浓度检测，低浓度工作液（2000倍稀释）只能用于低浓度检测。避光于室温下孵育2－5分钟。要确保小细管中加入了足够体积的测量液，对10x10mm比色杯来说，不能低于2mL，对MinicellAdaptorKit不能低于50µL。
5、选择微型荧光计的蓝色激发光模式，用荧光值最大的样品校正仪器[注意：为了获得最佳的检测灵敏度，高浓度和低浓度应该分开测量]。测量剩余样品的荧光值，微型荧光计将给出一个读数，数据可以用来产生对RNA浓度的标准曲线。
图1(图1请参考说明书）用RiboGreenRNA试剂测量标准核糖体RNA高浓度系列(A)和低浓度系列(B)获得的标准曲线.两个系列是分开测量的。
四、样品分析
1、用1XTE缓冲液稀释样品到合适体积(1.0mL到10x10mm比色杯或25-100µL到小细管)。每个实验配制几个不同浓度可能更好，多稀释几个浓度有助于降低特定污染物的干扰作用。然而,也要避免特别小的体积，因为难以准确测量。另外，同一个实验中，杂质水平尽量保持一致，要降低杂质引起的样品之间信号差异。例如，如果一系列RNA样品含盐浓度相差很大，那么它们就无法用一个简单的标准曲线来进行比较。为了避免这样的问题，所有样品中杂质浓度应该相同，如果可能，请参照（五、去除样品中DNA）如何降低样品中DNA相关信息。
2、每个样品中加入等体积的2XRiboGreen测量试剂，室温下避光孵育2－5分钟。
3、测定每个样品的荧光值，仪器条件与制作标准曲线时相一致，参照（三、RNA标准曲线的第5条内容）。
五、去除样品中DNA
RiboGreenreagent也可以结合DNA，样品前处理中可以用无RNA酶的DNA酶来去除DNA和RiboGreenreagent结合产生的荧光干扰，确保样品中的荧光全部来自试剂和RNA的结合。
1、准备10XDNasebuffer：无核酸酶的200mMTris-HCl,pH7.5,含100mMMgCl2和20mMCaCl2。
2、向每个含DNA样品中加0.11倍体积的10XDNasebuffer(例如，如果样品为9mL，就加入1mL的10Xbuffer)。
3、按照1mgDNA添加5u无RNase的DNaseI。
4、37°C孵育90分钟。
5、用TE缓冲液稀释至少10倍稀释样品以降低RiboGreen测量中盐的干扰。
6、按照上述步骤进行RiboGreen分析。
一、缓冲液制备
TE缓冲液(10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH7.5)用来稀释RiboGreen试剂和RNA样品，必须保证TE缓冲液没有受到核酸及核酸酶的污染。在处理和准备各种材料及试剂时应使用一次性手套。所有的溶液应该存放在灭菌过的一次性的塑料瓶或无核酸酶污染的玻璃瓶中。应使用无核酸酶污染的吸管。包含在RiboGreenRNA试剂盒中的20XTE缓冲液是无核酸及核酸酶污染的。缓冲液可以用无核酸酶污染的纯水来稀释20X浓缩TE缓冲液来获得1XTE工作液，无核酸酶纯水可通过蒸馏、用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)去离子获得，在37°C下孵育数小时并在15PSIinch下灭菌15分钟可以去除DEPC。
注:DEPC可能是一种致癌物质，应谨慎处理。含胺类物质，例如Tris，能够和DEPC快速反应，因此将此类物质加入到DEPC处理水中应在DEPC通过加热去除后再加入。加热去除DEPC对于阻止样品中RNA的羧化和羟基化也是很重要的。
二、试剂制备
实验当天，用1XTE缓冲液整数倍稀释RiboGreen浓缩液成2X工作液（DMSO包装贮存）。如果是高浓度检测，稀释200倍，例如：要准备足够测量20个样品的工作液（2mL体积），可加100µLRiboGreen到19.9mL1XTE中；如果是低浓度检测,稀释2000倍，例如：要准备足够测量20个样品的工作液（2mL体积），可加10µLRiboGreen到20.0mL1XTE中。试剂配制在灭菌过的一次性的聚丙烯塑料瓶中会优于在玻璃瓶中，因为玻璃表面可能会吸附试剂。因为RiboGreen试剂可能有光降解现象，用铝箔纸封口并放置在暗处可保护工作液。工作液配制好后尽快使用，在数小时内使用会取得最好的结果。
三、RNA标准曲线
1、在塑料瓶中用无核酸酶的1XTE配制浓度为2µg/mLRNA溶液。用比色杯在1cm长度通路下测量该RNA溶液在260nm(A260)下的基本吸光值，A260＝0.05相当于RNA浓度2µg/mL。RiboGreenRNA定量试剂盒包括16S和23S核糖体标准RNA，浓度为100µg/mL，可以用1XTE稀释50倍成为2µg/mL的工作液。例如，40µL的标准RNA用1.96mL的TE缓冲液稀释，足够制作标准曲线时使用。推荐使用与待测RNA类型相同的纯化RNA作为标准制作标准曲线。一般来说，等量的异源单链RNA能产生大致相等的荧光强度。在核苷、盐、尿素、乙醇、氯仿、去污剂、蛋白质和琼脂糖这些污染核酸试剂的复合物存在时，线性关系仍可保持。但荧光强度可能会受到影响。因此，制作标准曲线的RNA溶液和待测样品应该用相同的方法处理，使得样品和标样中杂质的含量水平相当。
2、制作高浓度标准曲线时，通过稀释2µg/mLRNA溶液配制一系列的2X终浓度RNA标准溶液至一次性玻璃容器或者无核酸酶的塑料管中，最后转移到小细胞管中。(见表1)
| 2XRNA溶液浓度ng/mL | 2XRNA溶液体积(mL) | 2X低浓度工作液体积(mL) | RiboGreen试剂测定RNA的终浓度(ng/mL) |
| 1000 | 1 | 1 | 500 |
| 200 | 1 | 1 | 100 |
| 100 | 1 | 1 | 50 |
| 50 | 1 | 1 | 25 |
| 0 | 1 | 1 | - |
| 表1用10×10mm比色杯时高浓度RNA标准曲线。 | |||
| 2XRNA溶液浓度ng/mL | 2XRNA溶液体积(mL) | 2X低浓度工作液体积(mL) | RiboGreen试剂测定RNA的终浓度(ng/mL) |
| 100 | 1 | 1 | 50 |
| 50 | 1 | 1 | 25 |
| 20 | 1 | 1 | 10 |
| 10 | 1 | 1 | 5 |
| 2 | 1 | 1 | 1 |
| 0 | 1 | 1 | - |
| 表2用10x10mm比色杯时低浓度RNA标准曲线。 | |||
5、选择微型荧光计的蓝色激发光模式，用荧光值最大的样品校正仪器[注意：为了获得最佳的检测灵敏度，高浓度和低浓度应该分开测量]。测量剩余样品的荧光值，微型荧光计将给出一个读数，数据可以用来产生对RNA浓度的标准曲线。
图1(图1请参考说明书）用RiboGreenRNA试剂测量标准核糖体RNA高浓度系列(A)和低浓度系列(B)获得的标准曲线.两个系列是分开测量的。
四、样品分析
1、用1XTE缓冲液稀释样品到合适体积(1.0mL到10x10mm比色杯或25-100µL到小细管)。每个实验配制几个不同浓度可能更好，多稀释几个浓度有助于降低特定污染物的干扰作用。然而,也要避免特别小的体积，因为难以准确测量。另外，同一个实验中，杂质水平尽量保持一致，要降低杂质引起的样品之间信号差异。例如，如果一系列RNA样品含盐浓度相差很大，那么它们就无法用一个简单的标准曲线来进行比较。为了避免这样的问题，所有样品中杂质浓度应该相同，如果可能，请参照（五、去除样品中DNA）如何降低样品中DNA相关信息。
2、每个样品中加入等体积的2XRiboGreen测量试剂，室温下避光孵育2－5分钟。
3、测定每个样品的荧光值，仪器条件与制作标准曲线时相一致，参照（三、RNA标准曲线的第5条内容）。
五、去除样品中DNA
RiboGreenreagent也可以结合DNA，样品前处理中可以用无RNA酶的DNA酶来去除DNA和RiboGreenreagent结合产生的荧光干扰，确保样品中的荧光全部来自试剂和RNA的结合。
1、准备10XDNasebuffer：无核酸酶的200mMTris-HCl,pH7.5,含100mMMgCl2和20mMCaCl2。
2、向每个含DNA样品中加0.11倍体积的10XDNasebuffer(例如，如果样品为9mL，就加入1mL的10Xbuffer)。
3、按照1mgDNA添加5u无RNase的DNaseI。
4、37°C孵育90分钟。
5、用TE缓冲液稀释至少10倍稀释样品以降低RiboGreen测量中盐的干扰。
6、按照上述步骤进行RiboGreen分析。
自备材料：
1、微型荧光计；1cm石英比色皿
2、RiboGreen dsDNA 定量检测试剂盒， 1mL 单位量的试剂浓缩液足够 2mL 体积的 200 次测定。
20X TE 缓 冲液 (25 mL ，200 mM Tris-HCl, 20 mM EDTA, pH 7.5 ，DEPC 处理水) 标准 16S 和 23S 核 糖体 RNA（100 µg/mL ，5 x 200 µL分装，共1 mL， 贮存于TE 缓冲液中）试剂足够200 次使用（可测量 RNA 浓度范围为 20ng/mL到1 µg/mL ，每次2.0ml 用量）
2、RiboGreen dsDNA 定量检测试剂盒， 1mL 单位量的试剂浓缩液足够 2mL 体积的 200 次测定。
20X TE 缓 冲液 (25 mL ，200 mM Tris-HCl, 20 mM EDTA, pH 7.5 ，DEPC 处理水) 标准 16S 和 23S 核 糖体 RNA（100 µg/mL ，5 x 200 µL分装，共1 mL， 贮存于TE 缓冲液中）试剂足够200 次使用（可测量 RNA 浓度范围为 20ng/mL到1 µg/mL ，每次2.0ml 用量）
保存条件：
–20℃ 避光 密封干燥
注意事项：
1、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、以上信息仅做参考交流之用。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、以上信息仅做参考交流之用。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
(2).jpg)
体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
