ABTS清除能力检测试剂盒 - CAS号查询_生物试剂_化学试剂_分析试剂

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英文名称:	ABTS Scavenging Capacity Assay Kit
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PS2020 ABTS清除能力检测试剂盒微板法 (普西唐-psaitong)

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产品简介：

ABTS 法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用最广泛的间接检测方法。ABTS 是一种介体物质，用 K₂S₂O₈与 ABTS 直接生成稳定的阳离子自由基ABTS⁺，在734nm处有最大吸收峰。被测物质加入 ABTS⁺溶液后，所含抗氧化成分能与ABTS 自由基发生反应而使反应体系褪色，734nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。通过测定吸光度下降的程度来，进而对样本中 ABTS 清除能力进行定量分析。

操作步骤：

工作液配置：临用前将加水溶解后的试剂一和试剂二按照 1:1 比例混合，避光反应12h后（二天内用完），再用无水乙醇稀释 20-30 倍备用（使 A 空白管在0.7±0.1，用乙醇稀释后的液体即工作液最好现配现用）。
建议正式实验前，选取 2 个样本做预测定，了解实验样品情况，熟悉流程，避免样本和试剂浪费！
一、样本准备：
1、组织样本：
a、称取约 0.1g 新鲜组织或者 0.05g 烘干样本（将样本在 105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛，得到烘干样本）；
b、加入 1mL 的 80%甲醇提取液（若鲜样需研磨均质），于 60℃，200-300W条件下超声提取 30min（间隔 5min 振荡混匀一次），若有损失需用 80%甲醇定容至1mL；
c、12000rpm，室温离心 10min，取上清测定。
注:若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例进行提取。
2、细菌/细胞样本：
a、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；
b、取约 5×10⁶个细菌或细胞加入 1mL 80%甲醇提取液进行匀浆；匀浆后转入2mL 离心管中；于 60℃，200-300W 条件下超声提取 30min（间隔 5min 振荡混匀一次），若有损失需用 80%甲醇定容至 1mL；
c、12000rpm，室温离心 10min，取上清液，置冰上待测。
注：若增加样本量，可按照每 0.5~1×10⁷个细菌/细胞加入 1ml 提取液体积的比例进行提取。
3、液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。
二、样品测定：
1、酶标仪预热 30min，设定波长到 734nm。
2、不同样本清除能力不一，可先选取 2 个样本做检测，若 A 测定-A 对照接近零，需对样本进行稀释（用 80%甲醇提取液稀释）后再检测，稀释倍数 D 代入公式计算。
3、在 96 孔板中依次加入：

试剂名称（µL）	测定管	对照管	空白管
样本	10	10	—
无水乙醇	—	190	10
工作液	190	—	190
混匀，室温(25℃)避光静置 6min，于 734nm 处读取吸光值A。

计算公式:
1、标准曲线：y = 0.4349x + 0.3646；x 是标准品 Trolox 浓度（μg/mL），y 是清除率（%）。
2、ABTS 自由基清除率(%)=[(1-(A 测定-A 对照)÷A 空白)×100]%
3、定义：用从标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量来表示样本的 ABTS 自由基清除能力。
4、按样本质量计算：
ABTS 自由基清除能力(μg Trolox/g 鲜重) =[(清除率-0.3646)÷0.4349×V1]÷(V1÷V×W)×D=2.3×(清除率-0.3646)÷W×D
举例：若清除率是 70%，则用 70 代入公式计算，即： ABTS 自由基清除能力(μg Trolox/g 鲜重) =[(70-0.3646)÷0.4349×V1]÷(V1÷V×W)×D
5、按细菌/细胞计算：
ABTS 自由基清除能力(μg Trolox/10⁴cell) =[(清除率-0.3646)÷0.4349×V1]÷(V1÷V×500)×D=2.3×(清除率-0.3646)÷500×D
举例：若清除率是 70%，则用 70 代入公式计算，即：
ABTS 自由基清除能力(μg Trolox/10⁴cell) =[(70-0.3646)÷0.4349×V1]÷(V1÷V×500)×D
6、液体样本：
ABTS 自由基清除能力(μg Trolox/mL) =[(清除率-0.3646)÷0.4349]×D=2.3×(清除率-0.3646)×D
举例：若清除率是 70%，则用 70 代入公式计算，即：
ABTS 自由基清除能力(μg Trolox/mL)=[(70-0.3646)÷0.4349]×D

V---加入提取液体积，1 mL	V1---反应中样品体积，10μL=0.01 mL
W---样本质量，g	Trolox 分子量----250.29
500---细菌/细胞数量，万	D---稀释倍数，未稀释即为1

标准曲线制作:
1、制备标准品母液（1mg/mL）：称取 2mg 标准品至离心管中，加入2mL 甲醇，充分溶解混匀，即 1mg/mL 标准品，备用。
2、把母液用甲醇稀释成以下浓度梯度的标准品：0，20，40，60，80，100μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、按照测定管加样体系操作，依据结果即可制作标准曲线。

组分：

组分名称	PS2020-96T	Storage	备注
试剂一	粉末×2 支	4℃	用前甩几下使粉剂落入底部，每支加0.49mL 蒸馏水溶解（溶解后一周内用完）。
试剂二	粉末×1 支	4℃	临用前甩几下使粉剂落入底部，再加2.86mL 蒸馏水，充分溶解备用。
标准品	粉末×1 支	4℃	若重新做标曲，则用到该试剂。
96 孔酶标板		1 个