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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | KOD PCR MasterMix 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | KOD PCR MasterMix | ||||
| 别名: | 3 kb困难片段高保真 A8 mix Plus | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
本产品包含KOD DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵
敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。本产品使用方便快捷，能避免PCR 操作过程中的污染，使用时只需取适量2×KOD PCR MasterMix 溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix 溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。KOD 酶所具有的超强3’→ 5’外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq 的约50 倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase 的5倍，Taq DNA Polymerase 的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb 以内的PCR 产物(复杂基因组DNA 扩增建议不超过2kb），扩增所得的DNA 为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。
本产品适用于PCR，尤其用于PCR 产物的克隆，DNA片段的平滑化。
活性定义：
75℃活性测定条件下，在30min 内摄入10nmoles 的dNTPs 使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。
本产品适用于PCR，尤其用于PCR 产物的克隆，DNA片段的平滑化。
活性定义：
75℃活性测定条件下，在30min 内摄入10nmoles 的dNTPs 使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。
操作步骤：
| 建议PCR条件(以50 μl反应体系为例，如反应体系不同，可按此比例增加或减少用量) | ||
| Component | Volume | Final Concentration |
| Template | Variable | ＜0.5μg |
| Forward Primer 10 μM | 1 μl | 0.2 μM |
| Reverse Primer 10 μM | 1 μl | 0.2 μM |
| 2× KOD PCR MasterMix | 25 μl | 1× |
| dH2O | Up to 50 μl | |
| 用无菌PCR级别的水补至终体积50 μl。实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加2× KOD PCR MasterMix（使用前请保证充分溶解并混匀）。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。 注意：在冰浴上混合PCR各种成分，防止KOD DNA 聚合酶降解引物和模板。 |
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| PCR条件的优化 | ||||
| 1：质粒或者噬菌体模板：模板量5-20ng，循环参数如下表： | ||||
| Cycling parameters | <1kbp target DNA | 1-2kbp target DNA | 3-4kbp target DNA | 5-6kbp target DNA |
| Step 1 | 94℃ 2min | 94℃ 2min | 94℃ 2min | 94℃ 2min |
| Step 2 | 94℃ 20sec | 94℃ 20sec | 94℃ 20sec | 94℃ 30sec |
| Step 3 | Ta 20sec | Ta 20sec | Ta 20sec | Ta 30sec |
| Step 4 | 72℃ 20sec | 72℃ 30sec | 72℃ 40sec | 72℃ 60sec |
| Step 5 | 72℃ 5min | 72℃ 5min | 72℃ 5min | 72℃ 5min |
| Repeat step 2-4 for 30-35cycles | ||||
| Ta= Tm－5℃ | ||||
| 2：基因组DNA和cDNA模板：基因组DNA模板量为50-100ng，1-2μl cDNA（起始转录用的RNA为500ng），循环参数如下表 | |
| Cycling parameters | <2kbp target DNA |
| Step 1 | 94℃ 2min |
| Step 2 | 94℃ 20-30sec |
| Step 3 | Ta 15-20sec |
| Step 4 | 72℃ 20-60sec |
| Step 5 | 72℃ 5min |
| Repeat step 2-4 for 30-35cycles | |
| Ta= Tm - 5℃ | |
保存条件：
-20℃
注意事项：
1：F8 扩增速度极快，短片段或者简单模板如质粒模板可以尝试5 秒/kb 延伸速度并采用较少循环数以进一步缩短PCR 时间。长片段(≥3kb)或者复杂模板产量较低可以采用15-20秒/kb 延伸速度或者采用较多循环数。
2：F8 产量较低时可尝试采用较长的延伸时间(如20 秒/kb）和循环数（如35 个）可以提高PCR 产物的产量。
3：对于GC 含量很高的模板，短片段预变性和变性温度可以提高到98℃和/或适当延长变性时间。长片段为了避免DNA 损伤不应该提高变性温度，应该适当延长预变性时间到5分钟，变性时间可以适当提高5-10秒。
4：如果扩增模板GC 含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO 到终浓度1%-8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）。
5：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2：F8 产量较低时可尝试采用较长的延伸时间(如20 秒/kb）和循环数（如35 个）可以提高PCR 产物的产量。
3：对于GC 含量很高的模板，短片段预变性和变性温度可以提高到98℃和/或适当延长变性时间。长片段为了避免DNA 损伤不应该提高变性温度，应该适当延长预变性时间到5分钟，变性时间可以适当提高5-10秒。
4：如果扩增模板GC 含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO 到终浓度1%-8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）。
5：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
分析证书(COA)
Lot/Batch Number
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
