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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | 小鼠间充质干细胞成软骨诱导分化与染色试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
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| 英文名称: | |||||
| 别名: | 小鼠间充质干细胞成软骨诱导分化与染色试剂盒 | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）是中胚层来源的多能干细胞，具有高度自我更新能力和多项分化潜能，体外在一定的条件下可以被诱导分化成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会（ISCT）将此三项检测指标确定为MSC鉴定的必检项目，以MSC为基础的研究报道均会对此三项指标进行鉴定。
MSC被诱导分化成软骨细胞是一个受多种因素控制的复杂过程，受多种细胞因子和激素的调控。
本产品包括成软骨诱导培养体系所有成分以及鉴定所用的阿利新蓝染色液，提供了一种稳定有效的将小鼠间充质干细胞诱导分化成软骨的方法。可用于小鼠骨髓、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成软骨诱导分化与染色，兼容诱导分化过程中的其他检测，如mRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。
MSC被诱导分化成软骨细胞是一个受多种因素控制的复杂过程，受多种细胞因子和激素的调控。
本产品包括成软骨诱导培养体系所有成分以及鉴定所用的阿利新蓝染色液，提供了一种稳定有效的将小鼠间充质干细胞诱导分化成软骨的方法。可用于小鼠骨髓、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成软骨诱导分化与染色，兼容诱导分化过程中的其他检测，如mRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。
操作步骤：
一：成软骨诱导分化非完全培养基的配制
1：解冻A-F组份，用75%乙醇擦拭消毒试剂盒中各管表面，然后将B-F组分全部加入A组分中，轻摇试剂瓶混合均匀，制备成软骨诱导分化非完全培养基混合液。可以吸取少量基础培养基A润洗各 管1-2次，尽量将所有组分全部加到基础培养基中。软骨诱导分化非完全培养基混合液在4℃中可保存一个月。
2： TGF-β3分装及保存:将TGF-β3小量分装，在-20°C及以下温度保存，并于6个月之内使用完毕。
二：成软骨诱导分化完全培养基的配制
1：按照每1mL非完全培养基混合液中加入1μL TGF-β3的比例无菌吸取实验所需剂量的 TGF-β3，加到相应体积的非完全培养基混合液中，配制成软骨诱导分化完全培养基，轻轻 颠倒摇晃使其混合均匀。配制好的成软骨诱导分化完全培养基必须在12小时之内使用。
三：成软骨诱导分化操作规程
1：当MSC汇合度达80-90%时，消化细胞并计数。
2：取3-4×105个细胞到15mL离心管中，250×g，离心5min。
3：吸弃上清，加入0.5mL成软骨诱导分化非完全培养基混合液重悬细胞沉淀，150×g，离心5min。
4：重复步骤3，再次清洗细胞。
5：吸弃上清，加入0.5mL成软骨诱导分化完全培养基重悬细胞沉淀，150×g，离心5min。
6：离心后拧松离心管盖便于气体交换。置于37°C，5% CO2培养箱中培养。最后一次离心后不需要吸掉上清液并重悬细胞，且24h内不要随意晃动离心管。
7：当细胞团在离心管底部呈球形的团状时(一般为24h或48h后，实际视细胞生长情况而定)，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。
8：自接种时间开始计算，每隔2-3天更换0.5mL新鲜的成软骨诱导分化完全培养基培养。注意:小心操作，不要吸出细胞球。
9：换液之后，轻轻地摇动离心管或轻弹离心管底部使细胞球脱离管底悬浮在液体中，稍加拧松离心管盖，放入37°C，5% CO2培养箱中培养。
10：一般持续诱导21-28天后，可将软骨球制作成冷冻切片或经甲醛溶液固定后制作成石蜡切片，最后进行阿利辛蓝染色。
四：软骨球石蜡切片的阿利新蓝染色
1：清洗:固定后的软骨球用PBS清洗2次。
2：切片:软骨球经脱水、石蜡包埋后切片。
3：切片进行脱蜡和复水。
4：染色液A染色3min。
5：直接更换染色液B染色30min。
6：流水冲洗5min。
7：无水乙醇脱水两次，5min/次。
8：二甲苯透明两次，5min/次，中性树胶封片。
9：显微镜下观察阿利辛蓝染色效果，阿利辛蓝染色部分显示硫酸软骨素和硫酸胶质等蛋白的存在，呈现典型的成软骨分化。
1：解冻A-F组份，用75%乙醇擦拭消毒试剂盒中各管表面，然后将B-F组分全部加入A组分中，轻摇试剂瓶混合均匀，制备成软骨诱导分化非完全培养基混合液。可以吸取少量基础培养基A润洗各 管1-2次，尽量将所有组分全部加到基础培养基中。软骨诱导分化非完全培养基混合液在4℃中可保存一个月。
2： TGF-β3分装及保存:将TGF-β3小量分装，在-20°C及以下温度保存，并于6个月之内使用完毕。
二：成软骨诱导分化完全培养基的配制
1：按照每1mL非完全培养基混合液中加入1μL TGF-β3的比例无菌吸取实验所需剂量的 TGF-β3，加到相应体积的非完全培养基混合液中，配制成软骨诱导分化完全培养基，轻轻 颠倒摇晃使其混合均匀。配制好的成软骨诱导分化完全培养基必须在12小时之内使用。
三：成软骨诱导分化操作规程
1：当MSC汇合度达80-90%时，消化细胞并计数。
2：取3-4×105个细胞到15mL离心管中，250×g，离心5min。
3：吸弃上清，加入0.5mL成软骨诱导分化非完全培养基混合液重悬细胞沉淀，150×g，离心5min。
4：重复步骤3，再次清洗细胞。
5：吸弃上清，加入0.5mL成软骨诱导分化完全培养基重悬细胞沉淀，150×g，离心5min。
6：离心后拧松离心管盖便于气体交换。置于37°C，5% CO2培养箱中培养。最后一次离心后不需要吸掉上清液并重悬细胞，且24h内不要随意晃动离心管。
7：当细胞团在离心管底部呈球形的团状时(一般为24h或48h后，实际视细胞生长情况而定)，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。
8：自接种时间开始计算，每隔2-3天更换0.5mL新鲜的成软骨诱导分化完全培养基培养。注意:小心操作，不要吸出细胞球。
9：换液之后，轻轻地摇动离心管或轻弹离心管底部使细胞球脱离管底悬浮在液体中，稍加拧松离心管盖，放入37°C，5% CO2培养箱中培养。
10：一般持续诱导21-28天后，可将软骨球制作成冷冻切片或经甲醛溶液固定后制作成石蜡切片，最后进行阿利辛蓝染色。
四：软骨球石蜡切片的阿利新蓝染色
1：清洗:固定后的软骨球用PBS清洗2次。
2：切片:软骨球经脱水、石蜡包埋后切片。
3：切片进行脱蜡和复水。
4：染色液A染色3min。
5：直接更换染色液B染色30min。
6：流水冲洗5min。
7：无水乙醇脱水两次，5min/次。
8：二甲苯透明两次，5min/次，中性树胶封片。
9：显微镜下观察阿利辛蓝染色效果，阿利辛蓝染色部分显示硫酸软骨素和硫酸胶质等蛋白的存在，呈现典型的成软骨分化。
组分：
| 组分 | 组分名称 | 包装规格(200mL/Kit) | 储存温度/效期 |
| 组分A | 小鼠间充质干细胞成软骨诱导分化基础培养基 | 194mL | 4℃,12个月 |
| 组分B | 地塞米松 | 20μL | -20,12个月 |
| 组分C | 抗坏血酸 | 400μL | -20℃,12个月 |
| 组分D | 丙酮酸钠 | 200μL | 4℃,12个月 |
| 组分E | L-脯氨酸 | 200μL | -20℃,12个月 |
| 组分F | ITS | 2mL | 4℃,18个月 |
| 组分G | TGF-β3 | 200μL | -20℃,6个月 |
| 组分H | 染色液 A | 10mL | 4℃,12个月 |
| 组分I | 染色液 B | 10mL | 4℃,12个月 |
保存条件：
低温运输，按组分保存。
注意事项：
1：本产品所有组分均为无菌包装，在使用过程中请注意无菌操作，避免微生物污染。
2：诱导培养期间请将离心管盖拧松，保持透气，同时避免污染，小心操作。
3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2：诱导培养期间请将离心管盖拧松，保持透气，同时避免污染，小心操作。
3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
