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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | 小鼠间充质干细胞成脂诱导分化与染色试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
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| 英文名称: | |||||
| 别名: | 小鼠间充质干细胞成脂诱导分化与染色试剂盒 | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）是中胚层来源的多能干细胞，具有高度自我更新能力和多项分化潜能，体外在一定的条件下可以被诱导分化成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会（ISCT）将此三项检测指标确定为MSC鉴定的必检项目，以MSC为基础的研究报道均会对此三项指标进行鉴定。
在成脂分化作用下，MSC会先后诱导分化为前成脂细胞(preadipocytes)和脂肪细胞 (adipocytes)，后者聚集着大大小小的脂肪滴(lipid droplets)。油红O在脂肪中的溶解度大于 其在染液中的溶解度，因而使脂肪着色，呈现红色或橘红色。被染色的脂肪滴数量和深度会受到多种因素的影响，例如细胞类型、细胞代数、分化时间和培养条件等。
本产品包括成脂诱导培养体系所有成分以及鉴定所用的油红O染色 液，提供了一种稳定有效的将小鼠间充质干细胞诱导分化成脂的方法。可用于小鼠骨髓、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成骨诱导分化与染色，兼容诱导分化过程中的其他检测，如mRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。
在成脂分化作用下，MSC会先后诱导分化为前成脂细胞(preadipocytes)和脂肪细胞 (adipocytes)，后者聚集着大大小小的脂肪滴(lipid droplets)。油红O在脂肪中的溶解度大于 其在染液中的溶解度，因而使脂肪着色，呈现红色或橘红色。被染色的脂肪滴数量和深度会受到多种因素的影响，例如细胞类型、细胞代数、分化时间和培养条件等。
本产品包括成脂诱导培养体系所有成分以及鉴定所用的油红O染色 液，提供了一种稳定有效的将小鼠间充质干细胞诱导分化成脂的方法。可用于小鼠骨髓、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成骨诱导分化与染色，兼容诱导分化过程中的其他检测，如mRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。
操作步骤：
一：小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基A液的配制
1：2-8°C解冻一份特级胎牛血清、双抗、重组人胰岛素，室温解冻IBMX、罗格列酮、地塞米松，至完全溶解，轻晃摇匀。并用75%乙醇擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
2：将一份专用血清、双抗、重组人胰岛素、IBMX、罗格列酮、地塞米松全部加入一份恢复至室温的小鼠间充质干细胞成脂诱导分化基础培养基中。可以吸取少量基础培养基润洗各管1-2次，尽量将所有组分全部加入到基础培养基中。标为成脂诱导分化培养基A液。
3：轻轻颠倒摇晃配制好的小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基A液，使其混合均匀。制成的培养基可在4℃保存一个月。
二：小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基 B 液的配制
1：2-8°C解冻另外一份特级胎牛血清、双抗、重组人胰岛素至完全溶解，轻晃摇匀，并用75%乙醇擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
2：将此份专用血清、双抗、重组人胰岛素全部加入到一份成脂诱导分化基础培养基中。可以吸取少量基础培养基润洗各管1-2次，尽量将所有组分全部加入到基础培养基中。标为成脂诱导分化培养基B液。
3：轻轻颠倒摇晃配制好的小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基B液，使其混合均匀。制成的培养基可在4℃保存一个月。
三：成脂诱导分化操作规程(以6孔板为例)
1：当MSC融合度达到80-90%时，消化细胞并计数。
2：将细胞按照1×105cells/mL的密度接种到的六孔板中，每孔加入2 mL正常培养用完全培养基。
3：将细胞置于37°C，5% CO2的培养箱中进行培养。
4：每隔3天换液，待细胞融合度达到100%时继续培养1-3天再进行诱导操作。
5：小心地吸弃上清，每孔加入2 mL恢复至室温的小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基A液。
6：诱导培养3天后，吸去六孔板中的A液，加入2 mL小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基B液。
7：诱导培养1天后，吸去B液，换回A液继续诱导。
8：重复以上A液和B液“3+1”交替程序3-5次后(12-20天)，继续用B液维持培养4-7天直到脂滴变得足够大、圆。B液维持培养期间，每隔2-3天需要换用新鲜的B液。
四：油红O染色(以6孔板为例)
1：诱导成脂分化结束后，吸弃上清，PBS 清洗2-3遍，每孔加入2 mL 4%多聚甲醛溶液，固定 30 min。
2：油红O染色工作液配制方法:饱和油红O染液:蒸馏水=3:2，混匀后用中性滤纸过滤即可。
3：将4%多聚甲醛吸净，PBS清洗2遍。每孔中加入1 mL油红O染色工作液，染色30min。
4：吸净油红O染色工作液，PBS清洗2-3遍。
5：每孔加入1mL PBS，倒置显微镜下观察成脂染色效果。
6：显微镜下可观察，成脂分化细胞可见染成橘红至红色的脂质空泡，呈现典型的成脂分化。
1：2-8°C解冻一份特级胎牛血清、双抗、重组人胰岛素，室温解冻IBMX、罗格列酮、地塞米松，至完全溶解，轻晃摇匀。并用75%乙醇擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
2：将一份专用血清、双抗、重组人胰岛素、IBMX、罗格列酮、地塞米松全部加入一份恢复至室温的小鼠间充质干细胞成脂诱导分化基础培养基中。可以吸取少量基础培养基润洗各管1-2次，尽量将所有组分全部加入到基础培养基中。标为成脂诱导分化培养基A液。
3：轻轻颠倒摇晃配制好的小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基A液，使其混合均匀。制成的培养基可在4℃保存一个月。
二：小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基 B 液的配制
1：2-8°C解冻另外一份特级胎牛血清、双抗、重组人胰岛素至完全溶解，轻晃摇匀，并用75%乙醇擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
2：将此份专用血清、双抗、重组人胰岛素全部加入到一份成脂诱导分化基础培养基中。可以吸取少量基础培养基润洗各管1-2次，尽量将所有组分全部加入到基础培养基中。标为成脂诱导分化培养基B液。
3：轻轻颠倒摇晃配制好的小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基B液，使其混合均匀。制成的培养基可在4℃保存一个月。
三：成脂诱导分化操作规程(以6孔板为例)
1：当MSC融合度达到80-90%时，消化细胞并计数。
2：将细胞按照1×105cells/mL的密度接种到的六孔板中，每孔加入2 mL正常培养用完全培养基。
3：将细胞置于37°C，5% CO2的培养箱中进行培养。
4：每隔3天换液，待细胞融合度达到100%时继续培养1-3天再进行诱导操作。
5：小心地吸弃上清，每孔加入2 mL恢复至室温的小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基A液。
6：诱导培养3天后，吸去六孔板中的A液，加入2 mL小鼠间充质干细胞成脂诱导分化培养基B液。
7：诱导培养1天后，吸去B液，换回A液继续诱导。
8：重复以上A液和B液“3+1”交替程序3-5次后(12-20天)，继续用B液维持培养4-7天直到脂滴变得足够大、圆。B液维持培养期间，每隔2-3天需要换用新鲜的B液。
四：油红O染色(以6孔板为例)
1：诱导成脂分化结束后，吸弃上清，PBS 清洗2-3遍，每孔加入2 mL 4%多聚甲醛溶液，固定 30 min。
2：油红O染色工作液配制方法:饱和油红O染液:蒸馏水=3:2，混匀后用中性滤纸过滤即可。
3：将4%多聚甲醛吸净，PBS清洗2遍。每孔中加入1 mL油红O染色工作液，染色30min。
4：吸净油红O染色工作液，PBS清洗2-3遍。
5：每孔加入1mL PBS，倒置显微镜下观察成脂染色效果。
6：显微镜下可观察，成脂分化细胞可见染成橘红至红色的脂质空泡，呈现典型的成脂分化。
组分：
| 组分 | 组分名称 | 包装规格(2×200mL/Kit) | 储存温度/效期 |
| 组分A | 小鼠间充质干细胞成脂诱导分化基础培养基 | 2×175mL | 4℃,12个月 |
| 组分B | 特级胎牛血清 | 2×20mL | -20,24个月 |
| 组分C | 双抗 | 2×2mL | -20℃,12个月 |
| 组分D | 重组人胰岛素 | 2×200μL | -20℃,12个月 |
| 组分E | IBMX | 200μL | -20℃,12个月 |
| 组分F | 罗格列酮 | 200μL | -20℃,12个月 |
| 组分G | 地塞米松 | 200μL | 4℃,6个月 |
| 组分H | 饱和油红 O 染色液 | 5mL | 室温,12个月 |
保存条件：
低温运输，按组分保存。
注意事项：
1：本产品所有组分均为无菌包装，在使用过程中请注意无菌操作，避免微生物污染。
2：解冻后的血清出现少量絮状沉淀为正常现象，这些物质对产品质量无影响。
3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2：解冻后的血清出现少量絮状沉淀为正常现象，这些物质对产品质量无影响。
3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
