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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | 大鼠间充质干细胞成骨诱导分化与染色试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
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| 英文名称: | |||||
| 别名: | 大鼠间充质干细胞成骨诱导分化与染色试剂盒 | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）是中胚层来源的多能干细胞，具有高度自我更新能力和多项分化潜能，体外在一定的条件下可以被诱导分化成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会（ISCT）将此三项检测指标确定为MSC鉴定的必检项目，以MSC为基础的研究报道均会对此三项指标进行鉴定。
MSC能够分化为成骨细胞，沉积并矿化胞外基质蛋白，这是新生骨骼所必需的。分化成骨 后会矿化形成钙结节且有钙分泌，可以利用茜素红S (Alizarin Red S) 染色检视分化的成骨细胞。 不同的细胞来源(类型、年龄、代数)所得到的分化效果会有差异。
本产品包括成骨诱导培养体系所有成分以及鉴定所用的茜素红染色液， 提供了一种稳定有效的将大鼠间充质干细胞诱导分化成骨的方法。可用于大鼠骨髓、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成骨诱导分化与染色，兼容诱导 分化过程中的其他检测，如mRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。
MSC能够分化为成骨细胞，沉积并矿化胞外基质蛋白，这是新生骨骼所必需的。分化成骨 后会矿化形成钙结节且有钙分泌，可以利用茜素红S (Alizarin Red S) 染色检视分化的成骨细胞。 不同的细胞来源(类型、年龄、代数)所得到的分化效果会有差异。
本产品包括成骨诱导培养体系所有成分以及鉴定所用的茜素红染色液， 提供了一种稳定有效的将大鼠间充质干细胞诱导分化成骨的方法。可用于大鼠骨髓、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成骨诱导分化与染色，兼容诱导 分化过程中的其他检测，如mRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。
操作步骤：
一：大鼠间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基配制
1：2-8°C解冻组分B-E，室温解冻组分F，至完全溶解，轻晃摇匀，并用75%乙醇擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
2：将组分B-F全部加入成骨诱导分化基础培养基A中，制备成骨诱导分化完全培养基。可以吸取少量基础培养基A润洗各管1-2次，尽量将所有组分全部加入到基础培养基中。制成的培养基可在4℃保存一个月。
3：轻轻颠倒摇晃配制好的成骨诱导分化完全培养基，使其混合均匀。
二：明胶包被培养器皿表面
为了避免诱导过程中细胞漂浮，建议对成骨诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。
1：取能覆盖整个培养皿/板底面量的0.1%明胶入到培养皿/板中，如6孔板中加2mL/孔。
2：摇匀液体使其覆盖整个培养皿/板的底面。
3：将铺有0.1%明胶的培养皿/板室温放置(生物安全柜或超净工作台中)至少30min以上。
4：吸弃明胶，待培养皿/板晾干后，1×PBS洗2次，即可用于接种细胞。包被明胶的培养皿/板在无菌和明胶不蒸干的条件下，可以在4°C保存两周。
三：成骨诱导分化操作规程(以6孔板为例)
1：当MSC融合度达到80-90%时，消化细胞并计数。
2：将细胞按照1×105 cells/mL的密度接种在包被0.1%明胶的六孔板中，每孔加入2 mL正常培养用完全培养基。
3：将细胞置于37°C，5% CO2的培养箱中进行培养。
4：当细胞融合度达到60%-70%时，吸弃上清，PBS洗2 次，每孔加入2 mL恢复至室温的大鼠间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基。
5：每3 天全换液大鼠间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基(使用前需预热至37°C)。
6：诱导2-4周后，视细胞的形态变化及生长情况，用茜素红染液进行染色。为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每两天一次半量换液。
四：茜素红染色(以6孔板为例)
1：诱导成骨分化结束后，吸弃上清，PBS 清洗1-2遍，每孔加入2 mL 4%多聚甲醛溶液，固定30 min。
2：将4%多聚甲醛吸净，PBS清洗2遍。每孔中加入1 mL茜素红染液，染色5-10min。
3：吸净茜素红染液，PBS清洗2-3遍。
4：每孔加入1mL PBS，倒置显微镜下观察成骨染色效果。
5：显微镜下可观察到成骨分化细胞形成大量染成红色的钙结节，呈现典型的成骨分化。
1：2-8°C解冻组分B-E，室温解冻组分F，至完全溶解，轻晃摇匀，并用75%乙醇擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。
2：将组分B-F全部加入成骨诱导分化基础培养基A中，制备成骨诱导分化完全培养基。可以吸取少量基础培养基A润洗各管1-2次，尽量将所有组分全部加入到基础培养基中。制成的培养基可在4℃保存一个月。
3：轻轻颠倒摇晃配制好的成骨诱导分化完全培养基，使其混合均匀。
二：明胶包被培养器皿表面
为了避免诱导过程中细胞漂浮，建议对成骨诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。
1：取能覆盖整个培养皿/板底面量的0.1%明胶入到培养皿/板中，如6孔板中加2mL/孔。
2：摇匀液体使其覆盖整个培养皿/板的底面。
3：将铺有0.1%明胶的培养皿/板室温放置(生物安全柜或超净工作台中)至少30min以上。
4：吸弃明胶，待培养皿/板晾干后，1×PBS洗2次，即可用于接种细胞。包被明胶的培养皿/板在无菌和明胶不蒸干的条件下，可以在4°C保存两周。
三：成骨诱导分化操作规程(以6孔板为例)
1：当MSC融合度达到80-90%时，消化细胞并计数。
2：将细胞按照1×105 cells/mL的密度接种在包被0.1%明胶的六孔板中，每孔加入2 mL正常培养用完全培养基。
3：将细胞置于37°C，5% CO2的培养箱中进行培养。
4：当细胞融合度达到60%-70%时，吸弃上清，PBS洗2 次，每孔加入2 mL恢复至室温的大鼠间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基。
5：每3 天全换液大鼠间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基(使用前需预热至37°C)。
6：诱导2-4周后，视细胞的形态变化及生长情况，用茜素红染液进行染色。为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每两天一次半量换液。
四：茜素红染色(以6孔板为例)
1：诱导成骨分化结束后，吸弃上清，PBS 清洗1-2遍，每孔加入2 mL 4%多聚甲醛溶液，固定30 min。
2：将4%多聚甲醛吸净，PBS清洗2遍。每孔中加入1 mL茜素红染液，染色5-10min。
3：吸净茜素红染液，PBS清洗2-3遍。
4：每孔加入1mL PBS，倒置显微镜下观察成骨染色效果。
5：显微镜下可观察到成骨分化细胞形成大量染成红色的钙结节，呈现典型的成骨分化。
组分：
| 组分 | 组分名称 | 包装规格(200mL/Kit) | 储存温度/效期 |
| 组分A | 大鼠间充质干细胞成骨诱导分化基础培养基 | 175mL | 4℃,12个月 |
| 组分B | 特级胎牛血清 | 20mL | -20,24个月 |
| 组分C | 双抗 | 2mL | -20℃,12个月 |
| 组分D | 抗坏血酸 | 400μL | -20℃,12个月 |
| 组分E | β-甘油磷酸钠 | 2mL | -20℃,12个月 |
| 组分F | 地塞米松 | 20μL | -20℃,12个月 |
| 组分G | 茜素红染液 | 10mL | 4℃,6个月 |
| 组分H | 0.1%明胶 | 15mL | 4℃,12个月 |
保存条件：
低温运输，按组分保存。
注意事项：
1：本产品所有组分均为无菌包装，在使用过程中请注意无菌操作，避免微生物污染。
2：成骨分化容易使细胞卷起，应使用试剂盒中0.1%明胶包被培养皿/板。
3：解冻后的血清出现少量絮状沉淀为正常现象，这些物质对产品质量无影响。
4：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2：成骨分化容易使细胞卷起，应使用试剂盒中0.1%明胶包被培养皿/板。
3：解冻后的血清出现少量絮状沉淀为正常现象，这些物质对产品质量无影响。
4：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
