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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | Epoxy-Activated Beads 6B 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | Epoxy-Activated Beads 6B | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
包装规格：
5mL 25mL 100mL in glass bottle
产品简介：
一种环氧活化的琼脂糖微球，可以直接用于含氨基、巯基和羟基的蛋白和样品的耦联。预活化介质可以根据需要制备成特殊的亲和介质，快速有效地从复杂体系中一步纯化相应的物质。
产品性能：
产品性能：
| 项目 | 性能 |
| 基质 | 6%琼脂糖微球 |
| 活性基团密度 | 30-40 μmol/ml 介质 |
| 粒径范围 | 45-165 μm |
| 最大压力 | 0.1 MPa，1 bar |
| 储存缓冲液 | 100% 1,4-二氧六环 |
操作步骤：
一、缓冲液的准备
偶联液：0.1 M Na2CO3，pH8.5-10.0
封闭液：1 M 乙醇胺，pH8.0
清洗液 1：0.1 M 乙酸-乙酸钠，0.5 M NaCl，pH3.0
清洗液 2：0.1 M Tris-HCl，0.5 M NaCl，pH8.0
保护液：含 20%乙醇的 1XPBS
二、样品准备
样品用偶联液溶解，浓度约 5-10 mg/ml。
三、样品偶联
1：取适量的 Epoxy-Activated Beads 6B，去除保护液，切勿抽干，去离子水清洗三次，用偶联液清洗一次。
2：将溶解好的样品中溶解后转入清洗好的 Epoxy-Activated Beads 6B 中，填料：样品溶液体积比约为 1：1-2（V/V）。
3：25-40℃振荡混合反应 24 h。确保填料悬浮起来，否则会大大影响偶联效率。
4：反应完后收集偶联样品，以便检测偶联效率。偶联液清洗一遍。
5：加入等体积的封闭液，37℃振荡混合反应 1 h。
6：将上述反应体系取出，流干其中的溶液，用 3 倍柱体积的去离子水清洗填料，清洗液 1、去离子水、清洗液 2 和去离子水重复冲洗 2 次，然后保存在等体积的保护液中，于 2-8℃保存。
四、重力层析柱的装填
1：取合适规格的重力层析柱，装入下垫片，加入适量纯水润洗柱管和垫片，关闭下出口。
2：将偶联好的填料混合均匀，用枪头吸取适量浆液加入至重力柱中，打开下出口流干保护液。
3：加入适量纯水冲洗介质，待柱管中液体重力流干后，关闭下出口。
4：装入润洗后的上垫片，确保垫片与填料之前没有空隙，且保持水平。
5：装填好的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡。
五、样品纯化
5-1：缓冲液的准备
注：所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。
平衡/洗杂液：0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0
洗脱液：0.1 M 甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
5-2：孵育法纯化
1：根据纯化的样品量，取适量偶联好的填料加入层析柱中，重力流干保护液。
2：加入 5 倍介质体积的平衡液清洗介质，重力流干。
3：加入样品，封闭柱管两端，4℃振荡孵育 2-4 h 或者 37℃孵育 30 min-2 h。
4：孵育结束后，离心或过滤收集介质，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。
5：用 5 倍介质体积的洗杂液清洗介质，离心或过滤去除上清，重复 3-5 次，中间建议更换新离心管。
6：加入 3-5 倍柱体积的洗脱液进行洗脱，孵育 10-15 min，离心或过滤收集洗脱液，可重复 2-3 次。洗脱组分需要立即调成中性，一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和。
5-3：重力柱法纯化
1：将装填好的重力柱用 5 倍柱体积平衡液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲液体系下。
2：将样品加到平衡好的重力柱中，收集流出液，可以反复上样增加结合效率。
3：用 10 倍柱体积的洗杂液进行洗杂，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4：使用 5 倍柱体积的洗脱液洗脱，分管收集。洗脱组分需要立即调成中性，一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和。
注：介质洗脱结束后，用平衡液冲洗 5-10 柱体积，然后用纯水冲洗 5-10个柱体积，再用 20%乙醇冲洗 2 个柱体积，置于 2-8℃保存。
六、SDS-PAGE 检测
将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。
偶联液：0.1 M Na2CO3，pH8.5-10.0
封闭液：1 M 乙醇胺，pH8.0
清洗液 1：0.1 M 乙酸-乙酸钠，0.5 M NaCl，pH3.0
清洗液 2：0.1 M Tris-HCl，0.5 M NaCl，pH8.0
保护液：含 20%乙醇的 1XPBS
二、样品准备
样品用偶联液溶解，浓度约 5-10 mg/ml。
三、样品偶联
1：取适量的 Epoxy-Activated Beads 6B，去除保护液，切勿抽干，去离子水清洗三次，用偶联液清洗一次。
2：将溶解好的样品中溶解后转入清洗好的 Epoxy-Activated Beads 6B 中，填料：样品溶液体积比约为 1：1-2（V/V）。
3：25-40℃振荡混合反应 24 h。确保填料悬浮起来，否则会大大影响偶联效率。
4：反应完后收集偶联样品，以便检测偶联效率。偶联液清洗一遍。
5：加入等体积的封闭液，37℃振荡混合反应 1 h。
6：将上述反应体系取出，流干其中的溶液，用 3 倍柱体积的去离子水清洗填料，清洗液 1、去离子水、清洗液 2 和去离子水重复冲洗 2 次，然后保存在等体积的保护液中，于 2-8℃保存。
四、重力层析柱的装填
1：取合适规格的重力层析柱，装入下垫片，加入适量纯水润洗柱管和垫片，关闭下出口。
2：将偶联好的填料混合均匀，用枪头吸取适量浆液加入至重力柱中，打开下出口流干保护液。
3：加入适量纯水冲洗介质，待柱管中液体重力流干后，关闭下出口。
4：装入润洗后的上垫片，确保垫片与填料之前没有空隙，且保持水平。
5：装填好的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡。
五、样品纯化
5-1：缓冲液的准备
注：所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。
平衡/洗杂液：0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0
洗脱液：0.1 M 甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
5-2：孵育法纯化
1：根据纯化的样品量，取适量偶联好的填料加入层析柱中，重力流干保护液。
2：加入 5 倍介质体积的平衡液清洗介质，重力流干。
3：加入样品，封闭柱管两端，4℃振荡孵育 2-4 h 或者 37℃孵育 30 min-2 h。
4：孵育结束后，离心或过滤收集介质，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。
5：用 5 倍介质体积的洗杂液清洗介质，离心或过滤去除上清，重复 3-5 次，中间建议更换新离心管。
6：加入 3-5 倍柱体积的洗脱液进行洗脱，孵育 10-15 min，离心或过滤收集洗脱液，可重复 2-3 次。洗脱组分需要立即调成中性，一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和。
5-3：重力柱法纯化
1：将装填好的重力柱用 5 倍柱体积平衡液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲液体系下。
2：将样品加到平衡好的重力柱中，收集流出液，可以反复上样增加结合效率。
3：用 10 倍柱体积的洗杂液进行洗杂，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4：使用 5 倍柱体积的洗脱液洗脱，分管收集。洗脱组分需要立即调成中性，一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和。
注：介质洗脱结束后，用平衡液冲洗 5-10 柱体积，然后用纯水冲洗 5-10个柱体积，再用 20%乙醇冲洗 2 个柱体积，置于 2-8℃保存。
六、SDS-PAGE 检测
将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。
保存条件：
2-8°C
注意事项：
1、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
