产品简介:
T4 DNA ligase是将源于T4 噬菌体的 T4 DNA 连接酶基因在大肠杆菌中高效表达,经过多次柱层析纯化而获得的高效率、高纯度、高活性的 DNA 连接酶。该酶具有催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键的特性。不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。T4 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义:
(以粘性末端活性单位)1 单位是指在 20μl 1×T4 DNA ligase 反应缓冲液中,16˚C 反应条件下,30 分钟能使 50%经 HindIII 消化的λ DNA 片段[5’端浓度为 0.12 μM (300 μg/ml)]连接所需要的酶量。
反应条件:
1X T4 DNA Ligase 反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5 @25˚C), 10mM MgCl2,10mM DTT, 1mM ATP。推荐 DNA 5’末端浓度为 0.1-1.0μM, 16˚C 温育。 热失活:65˚C 10 分钟。
浓度:
400,000 units/ml
适用范围:
1:高效连接粘性末端和平末端: TA 克隆 和 Blunt 克隆;
2:修复 dsDNA 切刻,同时可以用于连接 RNA 和 DNA;
3:构建高丰度克隆文库
基本反应体系:
(以粘性末端活性单位)1 单位是指在 20μl 1×T4 DNA ligase 反应缓冲液中,16˚C 反应条件下,30 分钟能使 50%经 HindIII 消化的λ DNA 片段[5’端浓度为 0.12 μM (300 μg/ml)]连接所需要的酶量。
反应条件:
1X T4 DNA Ligase 反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5 @25˚C), 10mM MgCl2,10mM DTT, 1mM ATP。推荐 DNA 5’末端浓度为 0.1-1.0μM, 16˚C 温育。 热失活:65˚C 10 分钟。
浓度:
400,000 units/ml
适用范围:
1:高效连接粘性末端和平末端: TA 克隆 和 Blunt 克隆;
2:修复 dsDNA 切刻,同时可以用于连接 RNA 和 DNA;
3:构建高丰度克隆文库
基本反应体系:
与载体的连接反应(16˚C,30分钟-1小时,或者4˚C,过夜) | |
载体 DNA | 0.05-0.5μg |
DNA 片段 | 3 倍于载体的摩尔数 |
10×Ligase Buffer | 2 μl |
T4 DNA Ligase | 0.5-1μl(根据粘性/平末端调整) |
总体积 | 20μl |
与linker的连接反应(16˚C,1-4 小时,或者 4˚C,过夜) | |
DNA | 0.1-1μg |
linker | 10 倍于 DNA 的摩尔数 |
10×Ligase Buffer | 2 μl |
T4 DNA Ligase | 0.5-1μl |
总体积 | 20μl |
组分:
产品名称 | 规格 | 规格 |
T4 DNA Ligase | 10000U(25μl) | 20000U(50μl) |
保存条件:
-20˚C,24 个月;经常使用,建议分装保存。
注意事项:
1、ATP 是反应必须的辅因子。而大肠杆菌 DNA 连接酶则需要 NAD 作为辅因子。如 T4 DNA 连接酶稀释后于-20˚C 贮存,应选用含 50%甘油的贮存缓冲液;如稀释后立即使用,则用 1× T4 DNA 连接酶缓冲液稀释即可。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、以上信息仅做参考交流之用。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、以上信息仅做参考交流之用。
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )