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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | |||||
| 别名: | M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
适用于快速提取M13噬粒单链DNA。M13和其它的丝状噬菌体载体，在文库构建和为序列测序提供单链 DNA 和引人突变方面十分有用。将适量 M13 丝状噬菌体或者相关噬粒（M13 来源）感染的液体培养物离心，上清中的单链噬菌体DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链 DNA 从硅基质膜上洗脱。
操作步骤：
1：柱平衡：向吸附柱 EC 中加入 100 µl 平衡液，13,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，备用。
注：平衡液可以增强硅胶膜的吸附核酸能力，请使用当天处理的吸附柱。
2：将M13 丝状噬菌体或者相关噬粒（M13 来源）感染的液体培养物分装在 1.5mL 离心管，13,000rpm离心 5 分钟沉淀菌体。
3：小心取 800 μ l 上清转入新的 1.5mL 离心管，加入 400 μ l 结合液 MB，充分混匀。
注：如果使用的上清大于或者小于800 μ l，则结合液 MB 的用量需要按照比例增加或者减少。
4：将上述混合物加入一个吸附柱 EC 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心15 秒，倒掉收集管中的废液。
注：吸附柱一次最多只可以容纳大约 700 μ l 混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱内，重复步骤4。
5：加入 600 μ l 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇！），13,000rpm 离心 15 秒，弃废液。
6：将吸附柱 EC 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7：取出吸附柱 EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 60μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 70℃ 水浴中预热）， 室温放置 2 分钟，13,000rpm 离心 1 分钟。
注1：可将第一次洗脱所得溶液重新加入离心柱中，室温放置2 min，13, 000 rpm离心1 min。可以提高浓度10%左右。
注2：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于30μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
8：DNA 可以存放在-20°C , 如果要长时间存放，可以放置在－70℃。
注：平衡液可以增强硅胶膜的吸附核酸能力，请使用当天处理的吸附柱。
2：将M13 丝状噬菌体或者相关噬粒（M13 来源）感染的液体培养物分装在 1.5mL 离心管，13,000rpm离心 5 分钟沉淀菌体。
3：小心取 800 μ l 上清转入新的 1.5mL 离心管，加入 400 μ l 结合液 MB，充分混匀。
注：如果使用的上清大于或者小于800 μ l，则结合液 MB 的用量需要按照比例增加或者减少。
4：将上述混合物加入一个吸附柱 EC 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心15 秒，倒掉收集管中的废液。
注：吸附柱一次最多只可以容纳大约 700 μ l 混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱内，重复步骤4。
5：加入 600 μ l 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇！），13,000rpm 离心 15 秒，弃废液。
6：将吸附柱 EC 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7：取出吸附柱 EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 60μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 70℃ 水浴中预热）， 室温放置 2 分钟，13,000rpm 离心 1 分钟。
注1：可将第一次洗脱所得溶液重新加入离心柱中，室温放置2 min，13, 000 rpm离心1 min。可以提高浓度10%左右。
注2：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于30μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
8：DNA 可以存放在-20°C , 如果要长时间存放，可以放置在－70℃。
产品特点：
1：不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2：节省时间，简捷，单个样品操作一般可在 10 分钟内完成。
3：产量高，典型的产量 800µl M13 丝状噬菌体上清可以提取 3µg 噬菌体单链 DNA。
4：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达 1.7-1.9。可以直接用来测序，一般典型可辨认读长达850bp。
2：节省时间，简捷，单个样品操作一般可在 10 分钟内完成。
3：产量高，典型的产量 800µl M13 丝状噬菌体上清可以提取 3µg 噬菌体单链 DNA。
4：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达 1.7-1.9。可以直接用来测序，一般典型可辨认读长达850bp。
组分：
| 组分名称 | 50T | 100T | Storage |
| 平衡液 | 5 mL | 10 mL | RT |
| 结合液MB | 20 mL | 40 mL | RT |
| 漂洗液WB | 13 mL | 25 mL | RT |
| 第一次使用前按瓶子标签指示加入52mL无水乙醇 | 第一次使用前按瓶子标签指示加入100mL无水乙醇 | ||
| 洗脱缓冲液EB | 10 mL | 10 mL | RT |
| 吸附柱EC | 50 EA | 100 EA | RT |
| 收集管（2 mL） | 50 EA | 100 EA | RT |
常见问题：
问题与解决办法：
| 低核酸产量或者纯度不高 | 试剂盒储存在非最佳条件-建议：收到试剂盒后总是存放在室温（15℃-20℃)。 |
| 缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下-建议：储存在室温（15℃-20℃) , 每次用完后立刻盖紧盖子，以免溶液蒸发，pH改变和污染。 | |
| 漂洗液 WB 中忘记加无水乙醇-建议：第一次实验时，在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇。 | |
| 试剂和样品没有充分混匀-建议：加入每个试剂后都要充分混匀。 | |
| 噬菌体上清滴度太低-建议：离心取噬菌体感染细菌培养物上清时离心最好不要超过 5 分钟，转速不要超过 12,000rpm，否则噬菌体上清也可能离心下来。重新培养一次噬菌体感染细菌。 | |
| 洗脱效率不高-建议：确保做了步骤 6，否则残留乙醇会影响洗脱效率，仔细阅读步骤7和只使用洗脱缓冲液 EB 洗脱。 | |
| DNA 下游酶切不能切开或者酶切不完全 | 忘记做步骤6，乙醇抑制了酶切反应-建议：做步骤 6，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。 |
| 一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应-建议：将洗脱的基因组 DNA 溶液 13,000rpm 再离心一分钟，小心取上清使用。 | |
| 纯化的 DNA产物 D260数值异常偏高 | 一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了分光光度计读数-建议：将洗脱的回收 DNA 溶液 13,000rpm 再离心1分钟，小心取上清使用。 |
保存条件：
室温，12 个月。
使用说明：
附录（M13 噬菌体感染细菌培养上清准备过程）:
下面举例说明M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程，详细的M13噬菌体（或M13来源噬粒）培养和上清准备过程请参见『分子克隆』第二版。
1：37℃ 振摇过夜培养合适的噬菌体宿主菌。
2：使用6％的过夜培养菌接种新鲜的 LB 培养液，37℃振摇培养一个小时。
3：根据M13 噬菌体的储存液的浓度（滴度）按照 0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌体来感染宿主菌。37℃振摇培养 5-6 个小时。
4：将上面M13 丝状噬菌体或者相关噬粒（M13 来源）感染的液体培养物分装在 1.5ml离心管，12,000rpm 离心 5 分钟沉淀菌体。
5：可选步骤：小心取 1 ml上清转入新的 1.5ml 离心管，重复步骤4 离心 5 分钟。这步有助于去除上清中残留的微量宿主菌 RNA 或者 DNA。
6：小心取 800μl 上清转入新的 1.5ml 离心管。
7：按照操作步骤提取噬菌体单链 DNA。
下面举例说明M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程，详细的M13噬菌体（或M13来源噬粒）培养和上清准备过程请参见『分子克隆』第二版。
1：37℃ 振摇过夜培养合适的噬菌体宿主菌。
2：使用6％的过夜培养菌接种新鲜的 LB 培养液，37℃振摇培养一个小时。
3：根据M13 噬菌体的储存液的浓度（滴度）按照 0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌体来感染宿主菌。37℃振摇培养 5-6 个小时。
4：将上面M13 丝状噬菌体或者相关噬粒（M13 来源）感染的液体培养物分装在 1.5ml离心管，12,000rpm 离心 5 分钟沉淀菌体。
5：可选步骤：小心取 1 ml上清转入新的 1.5ml 离心管，重复步骤4 离心 5 分钟。这步有助于去除上清中残留的微量宿主菌 RNA 或者 DNA。
6：小心取 800μl 上清转入新的 1.5ml 离心管。
7：按照操作步骤提取噬菌体单链 DNA。
注意事项：
1、所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000rpm 的传统台式离心机。
2、开始实验前将需要的水浴先预热到 70℃备用。
3、结合液 MB 含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
2、开始实验前将需要的水浴先预热到 70℃备用。
3、结合液 MB 含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
分析证书(COA)
Lot/Batch Number
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
