M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 - CAS号查询_生物试剂_化学试剂_分析试剂

中文名称:	M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒一键复制产品信息
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别名:	M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒
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产品说明书

PS1546 M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 (普西唐-psaitong)

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产品简介：

M13和其它的丝状噬菌体载体，在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒（M13来源）感染的液体培养物离心，上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链DNA从硅基质膜上洗脱。

操作步骤：

以 800μl噬菌体感染细菌培养上清提取举例:
第一次使用前请先在漂洗液WB 中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1:柱平衡：向吸附柱EC中加入100 µl平衡液，13,000 rpm 离心1 min，弃滤液，备用。
注：平衡液可以增强硅胶膜的吸附核酸能力，请使用当天处理的吸附柱。
2：将M13 丝状噬菌体或者相关噬粒（M13 来源）感染的液体培养物分装在1.5 毫升离心管，12,000rpm 离心5 分钟沉淀菌体。
3：小心取800μl 上清转入新的1.5ml 离心管，加入400μl 结合液MB，充分混匀。
如果使用的上清大于或者小于800μl，则结合液MB的用量需要按照比例增加或者减少。
4：将上述混合物加入一个吸附柱EC 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心15秒，倒掉收集管中的废液。
吸附柱一次最多只可以容纳大约700μl混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱内，重复步骤4。
5：加入600μl 漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30 秒，弃废液。
6：将吸附柱EC 放回空收集管中，13,000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7：取出吸附柱EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加60μl 洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在50℃水浴中预热），室温放置1 分钟，12,000rpm 离心1 分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，10,000rpm 离心1 分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于40μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
8：DNA 可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

问题与解决办法：

低核酸产量或者纯度不高	试剂盒储存在非最佳条件-建议：收到试剂盒后总是存放在室温（15℃-20℃）
	缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下-建议：储存在室温（15℃-20℃），每次用完后立刻盖紧盖子，以免溶液蒸发， pH 改变和污染。
	漂洗液WB 中忘记加无水乙醇-建议：第一次实验时，在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇。
	试剂和样品没有充分混匀-建议：加入每个试剂后都要充分混匀。
	噬菌体上清滴度太低-建议：离心取噬菌体感染细菌培养物上清时离心最好不要超过5 分钟，转速不要超过12,000rpm，否则噬菌体上清也可能离心下来。重新培养一次噬菌体感染细菌。
	洗脱效率不高-建议：确保做了步骤5，否则残留乙醇会影响洗脱效率，仔细阅读步骤6 和只使用洗脱缓冲液EB 洗脱。
DNA 下游酶切不能切开或者酶切不完全	忘记做步骤5，乙醇抑制了酶切反应-建议：做步骤5，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。
DNA 下游酶切不能切开或者酶切不完全	一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应-建议：将洗脱的基因组DNA 溶液13,000rpm 再离心一分钟，小心取上清使用。
纯化的DNA 产物D260 数值异常偏高	一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了分光光度计读数-建议：将洗脱的回收DNA 溶液13,000rpm 再离心一分钟，小心取上清使用。

产品特点：

1：不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2：节省时间，简捷，单个样品操作一般可在10分钟内完成。
3：产量高，典型的产量800µl M13丝状噬菌体上清可以提取3µg噬菌体单链DNA。
4：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7-1.9。可以直接用来测序，一般典型可辨认读长达650bp。

组分：

组分	规格50T	规格100T	储存
平衡液	5mL	10mL	RT
结合液MB	25mL	20mL	RT
漂洗液WB(第一次使用前按说明加指定量乙醇)	13mL	25mL	RT
洗脱缓冲液EB	10mL	10mL	RT
吸附柱AC	50EA	100EA	RT
收集管(2mL)	50EA	100EA	RT

保存条件：

室温

注意事项：

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到50℃备用。
3.结合液MB含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

UN码：

HazardClass：

危害声明：

安全说明：

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