细胞浆/细胞核RNA快速提取试剂盒 - CAS号查询_生物试剂_化学试剂_分析试剂

中文名称:	细胞浆/细胞核RNA快速提取试剂盒文献数量：1 一键复制产品信息
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别名:	细胞浆/细胞核RNA快速提取试剂盒
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产品说明书

PS1544 细胞浆/细胞核RNA快速提取试剂盒 (普西唐-psaitong)

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产品简介：

本产品采用特制的裂解液，可以选择性的裂解细胞膜，释放细胞浆 RNA，离心取上清便可以提取细胞浆 RNA。去除上清以后的留下的细胞核沉淀可以提取细胞核 RNA，从而达到分别提取细胞浆 RNA和细胞核 RNA 的目的。适用于快速提取新鲜培养组织细胞的细胞浆/细胞核 RNA。

操作步骤：

第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇！
可选：每次临用前在 BufferRLN 中加入 1mMDTT(optional)
可选：每次临用前在 BufferRLN 中加入 1000U/mlRNaseinhibitor
一：样品处理裂解
1：培养细胞
A1：贴壁细胞：培养皿生长的细胞(< 3.5cm 直径）不需胰酶消化，彻底吸干净培养液体后加 1xPBS 漂洗一遍，彻底吸掉液体，接操作步骤 3；不方便直接裂解的培养容器，可以用细胞刮子刮下细胞，或者胰蛋白酶消化后吹打下来收集细胞到 1.5ml 离心管。
A2：悬浮细胞：收集<107 悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管。
B：300xg 离心 5 分钟。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。
C：快速拨弹（flick）离心管底部，使细胞沉淀松散，立刻接操作步骤 3。
2：小量组织
A：液氮研磨+匀浆：
可以直接切 10-15mg 组织放入研钵，加入液氮磨成粉，然后趁液氮挥发完，但尚未解冻时候加入175 μ lBufferRLN （事先放冰上预冷），用移液器吹打直到组织裂解完全，转移裂解物到新的离心管。
B：立刻接操作步骤4。
3：加入 175 μ lBufferRLN （事先放冰上预冷）裂解细胞。如果是培养皿，加入 BufferRLN 后摇晃将 BufferRLN 覆盖所有的细胞，置冰上裂解 5 分钟，中间可摇晃一两次帮助裂解。移液器吹打帮助裂解后转入新离心管。如果是收集的细胞沉淀，flick 管底打散沉淀后加 BufferRLN 充分重悬细胞，置冰上裂解 5 分钟，中间可颠倒一两次帮助裂解。
4：13,000rpm 离心 3 分钟。转移上清（含细胞浆 RNA）到一个新离心管。保留沉淀（含细胞核 RNA）。在沉淀中加入400 μ l 裂解液RLT Plus，振荡混匀置冰上备用。根据细胞的种类和多少，有时候可能看不见明显的细胞核沉淀。
二：细胞浆 RNA 提取
1：样品处理裂解第 4 步得到的上清中加入 600 μ l 裂解液RLT Plus，涡旋震荡混匀。加入430 μ l 无水乙醇，吹打混匀。
2：立刻将混合物每次小于 720 μ l 多可以分两次加入加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中） 13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
3：加 700μl 去蛋白液 RW1 ，室温放置 30 秒，13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
4：加入 500 μ l 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇！) 13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。加入 500 μ l 漂洗液 RW 重复一遍。
5：将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
6：取出吸附柱 RA，放入一个干净 1.5ml 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中间部位加 30-50 μ l RNase free water，室温放置 1 分钟，1,3000rpm 离心 1 分钟得到 RNA 溶液。
洗脱缓冲液体积不应少于30 μ l，体积过小影响回收效率。如果需要得到更大浓度的 RNA，将离心得到的 RNA 溶液加回到吸附柱重复洗脱一遍。
三：细胞核 RNA 提取
1：样品处理裂解第 4 步得到的重悬后沉淀（已经加入了 400 μ l 裂解液RLTPlus）吹打混匀后加入一个 RNA 吸附柱RA 上（吸附柱放入收集管中）。立刻 13,000rpm 离心 1 分钟，保留滤过液（细胞核 RNA 在滤过液中）。
2：在滤过液中加入一半体积（0.5 倍体积）乙醇,此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
3：立刻将混合物加入一个新的吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
4：接操作步骤“（二）细胞浆 RNA 提取 ”步骤 3 开始做，完成后续的实验操作。

产品特点：

1：完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2：简捷，单个样品操作一般可在25 分钟内完成。
3：独家研发成功基因组 DNA 清除柱技术/特殊配方可以有效清除 gDNA 残留。和进口的同类对比，大大减少了细胞核 RNA 里面的 gDNA 残留量。
4：多次柱漂洗确保高纯度 OD 260 /OD 280 典型的比值高达 2.1~2.2 基本无DNA 残留，可用于 RT-PCR，Northern blot 和各种实验。

组分：

组分名称	规格(50T)	储存
Buffer RLN	20mL	RT
Buffer RLN（No NP40）	20mL	RT
裂解液RLT Plus	50mL	RT
去蛋白液RW1	70mL	RT
漂洗液RW	20mL,第一次使用前按标签说明加无水乙醇	RT
RNase free H 2 O	5mL	RT
RNase free吸附柱RA和收集管	100套	RT

保存条件：

室温，12 个月。

注意事项：

1：需要使用新鲜的细胞，组织样品。
2：所有的离心步骤均可在室温完成，使用转速可以达到 13,000rpm的传统台式离心机。
3：需要自备乙醇，研钵可选。
4：裂解液RLT Plus和去蛋白液RW1 中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5：本试剂盒可以提取 100 个细胞浆 RNA 样品，或者 50 个细胞核样品。因为提取一个细胞核 RNA 样品需要 2 套 RNA 吸附柱，因此如果需要同时提取 50 个细胞浆 RNA 样品+50 个细胞核 RNA 样品，需要额外单独订购 50 套 RNA 吸附柱。
6：Buffer RLN 含有0.5% NP40，这是一种温和的非离子去垢剂，通过NP40来选择性裂解细胞膜（不裂解细胞核膜）来达到分开细胞浆/核RNA的目的，如有个别细胞膜特殊导致裂解过头，或者裂解不佳，导致细胞浆/核RNA分离不理想，我们配套提供了Buffer RLN(No NP40)，这个是未添加NP40的裂解液RLN，我们可以通过往里面添加梯度的NP40（例如添加NP40到终浓度0.4%，0.5%，0.6%，0.7%，0.8%等等）配成一系列的裂解液RLN（含不同的NP40浓度），来摸索最佳的裂解条件，同时也可以调整裂解的时间，以期达到最佳分离效果。

UN码：

HazardClass：

危害声明：

安全说明：

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