( 母液浓度为 40 mg/mL ), 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度,请先与我们客服联系。鬼笔环肽及其衍生物在纳摩尔浓度即可对F-actin 染色,是非常实用和方便的探针,通常用于组织切片或细胞培养物中 F-actin 的特异性荧光染色。
另外,鬼笔环肽及其衍生物很小,直径约1.2-1.5nm,分子量<2000 Da,经标记后的F-actin 仍维持许多标记前的功能。比如,标记的甘油抽提肌纤维仍能收缩;标记的肌动蛋白丝仍能在固相肌球蛋白基质中移动。
本品为 TRITC(四甲基异硫氰酸罗丹明)标记的鬼笔环肽,染色反应特异性强,对比性高,具有比 Actin 抗体更好的染色效果,适合用作 F-actin的定性和定量检测。另外,经本品结合后的 F-actin 仍能维持 actin 自身具有的许多生物学特性。 且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。
本产品以冻干粉形式提供,最大激发/发射波长(Ex/Em):Ex540-546nm,Em565-575nm。
1:母液的配置:使用前将本品回温至室温并简短离心,加入30uL DMSO使其充分溶解,混匀即可获得1000×TRITC 标记鬼笔环肽母液。根据实验情况,对其分装并于-20℃避光干燥保存。
2:工作液的配置:吸取1μL 以上TRITC 标记鬼笔环肽母液至1 mL PBS(含1%BSA)缓冲液中即可得到1×工作液。不同的细胞染色情况不同,相应TRITC 鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。推荐工作浓度为:80-200 nM。工作液现配现用。
二:染色步骤
1:细胞爬片生长>24h,使其密度达到50-60%汇合度。
2:吸掉培养液,37℃预热的1×PBS(pH 7.4)清洗细胞2 次。
3:使用溶于PBS 的4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定10-30min。
避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
4:室温条件下,用PBS 清洗细胞2-3 次,每次10min。
5:室温条件下,用丙酮(≤-20℃)脱水或者用0.5% Triton X-100 溶液透化处理5min。
6:室温条件下,用PBS 清洗细胞2-3 次,每次10min。
7:取100μL/孔(96 孔板)配制好的 TRITC 标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育30min(通常情况下,4℃-37℃孵育皆可)。
注意:为了降低背景,可于TRITC 标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥发,可将盖玻片转移到一个密封的容器内。
8:用PBS 清洗盖玻片3 次,每次5min。
9:使用100 μL/孔(96 孔板)即用型DAPI 溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约30s。
10:用PBS 清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂,然后用指甲油永久封片。
此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存,通常6 个月内可继续做F-actin 染色分析。
11:荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择 TRITC 激发/发射滤片(Ex/Em=545/570 nm)和 DAPI 激发/发射滤片(Ex/Em=364/454 nm)。
●1×PBS 缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别
●固定液4%多聚甲醛(溶于PBS 缓冲液)
●丙酮或透化液0.5% Triton X-100(溶于PBS 缓冲液)
●Fluoromount-GTM 水溶性封片剂(不含DAPI),DAPI
●DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片剂(含DAPI)
●BSA,标准级别
●载玻片和盖玻片
●盖玻片周围密封液(如透明指甲油)
●组装有TRITC 激发/发射滤片,以及DAPI 激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。
2:鬼笔环肽具有毒性,需小心操作。
3:本产品为冻干粉形式,微量不易观察 使用前瞬时离心,加溶剂溶解后使用, 溶解后接近无色。
4:产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
母液,添加 300 μLPEG300
混匀澄清,再加 50μLTween80, 混匀澄清,再加 600μLSaline/PBS/ddH2O
混匀澄清方案所需的各种助溶剂如: DMSO , PEG300 / PEG400 , Tween 80 , SBE-β-CD , 玉米油 等, 均可点击跳转或在网站搜索购买。
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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