( 母液浓度为 40 mg/mL ), 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度,请先与我们客服联系。| 中文名称: | DEAE-琼脂糖凝胶FF 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | DEAE-Sepharose FF | ||||
| CAS No: | 57407-08-6 | ||||
| CAS No: | 57407-08-6 | ||||
| 产品编号 | S10187 | Q10108 | S10185 | D20098 |
| 产品名称 | Q-琼脂糖凝胶 FF | Q-琼脂糖凝胶HP | DEAE-琼脂糖凝胶 FF | 二乙氨基琼脂糖凝胶 CL-6B |
| 类型 | 强阴离子 | 强阴离子 | 弱阴离子 | 弱阴离子 |
| 配基量 | 0.18-0.25mmol/ml | 0.14-0.20mmol/ml | 0.11-0.16mmol/ml | 0.13-0.17mmol/ml |
| 颗粒大小 | 45~165μm | ~45μm | 45~165μm | 45~165μm |
| 最大流速 | 200cm/h | 100cm/h | 200cm/h | 150cm/h |
| 工作 pH 值 | 2~12 | 2~12 | 2~9 | 3~9 |
| 稳定性 | 0.1M 的酸碱以及常规缓冲液 | |||
| 检测条件 | 层析柱 10mm×100mm 柱床高 5cm,25℃,流动相为 0.1mol/LNaCl。 | |||
1:让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液,对所有的缓冲液进行脱气处理(填料不可以超声)。
2:检查层析柱所有部件,特别是过滤网,密封圈,螺旋塞是否紧密,玻璃管是否干净和完整。
3:根据需要量取相应量的凝胶, 用去离子水清洗掉 20%乙醇。
4:将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
5:用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
二、平衡
1:让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和 pH 不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液,如 Tris、PBS 等。
三、上样
1:样品用平衡液配制, 浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再上样。
2:一般情况是让目标产品结合在柱子上, 用平衡液洗去杂质, 再选择一种洗脱液洗下目标产品。
3:介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和 pH 值。推荐的操作pH 应在缓冲液 pKa 的 0.5 个单位内, 并且和目标分子的等电点(pI)相差至少一个 pH 单位。
| Buffers for anion exchange chromatography | ||||
| pH interval | Substance | Conc.(mM) | Counter-ion | pKa(25℃)1 |
| 4.3-5.3 | N-Methylpiperazine | 20 | Cl- | 4.75 |
| 4.8-5.8 | Piperazine | 20 | Cl-or HCOO- | 5.33 |
| 5.5-6.5 | L-Histidine | 20 | Cl- | 6.04 |
| 6.0-7.0 | Bis-Tris | 20 | Cl- | 6.48 |
| 6.2-7.2 | Bis-Tris propane | 20 | Cl- | 6.65 |
| 8.6-9.6 | Bis-Tris propane | 20 | Cl- | 9.10 |
| 7.3-8.3 | Triethanolamine | 20 | Cl- or CH3COO- | 7.76 |
| 7.6-8.6 | Tris | 20 | Cl- | 8.07 |
| 8.0-9.0 | N-Methyldiethanolamine | 20 | SO42- | 8.52 |
| 8.0-9.0 | N-Methyldiethanolamine | 50 | Cl- or CH3COO- | 8.52 |
| 8.4-9.4 | Diethanolamine | 20 at pH 8.4 50 at pH 8.8 | Cl- | 8.88 |
| 8.4-9.4 | Propane 1,3-diamino | 20 | Cl- | 8.88 |
| 9.0-10.0 | Ethanolamine | 20 | Cl- | 9.50 |
| 9.2-10.2 | Piperazine | 20 | Cl- | 9.73 |
| 10.0-11.0 | Propane 1,3-diamino | 20 | Cl- | 10.55 |
| 10.6-11.6 | Piperidine | 20 | Cl- | 11.12 |
DEAE 介质可用增大盐浓度或减小 pH 值进行洗脱, 常用增大盐浓度的办法洗脱。
五、再生
一般用高盐浓度的缓冲液(含1-2mol/L NaCl)洗或减小pH 洗 10 倍以上柱体积,接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
六、在位清洗
1:对于以离子键结合上去的蛋白,可以用 2M Nacl 去除。
2:对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用 0.1M NaOH 去除。清洗完毕后,用至少10倍缓冲液平衡柱子。
2、使用完的填料,用纯水彻底冲洗,最后保存在2-8℃(保存溶液为 20%乙醇),不能冷冻。
3、上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45μm 的过滤器过滤。
4、在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.1摩尔。碱会使流速变慢。
5、不同的样品,吸附和洗脱方法不相同, 可以根据相关的资料进行。
6、离子交换介质在选择层析柱时,避免使用细长柱,会增加实验操作压力。
7、试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
分析证书(COA)
Lot/Batch Number
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
母液,添加 300 μLPEG300
混匀澄清,再加 50μLTween80, 混匀澄清,再加 600μLSaline/PBS/ddH2O
混匀澄清方案所需的各种助溶剂如: DMSO , PEG300 / PEG400 , Tween 80 , SBE-β-CD , 玉米油 等, 均可点击跳转或在网站搜索购买。
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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