复杂多糖多酚植物/真菌基因组DNA快速提取试剂盒 - 生化试剂_标准品_培养基-抑制剂-试剂盒-荧光染料-普西唐试剂商城

中文名称:	复杂多糖多酚植物/真菌基因组DNA快速提取试剂盒一键复制产品信息
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别名:	复杂多糖多酚植物/真菌基因组DNA快速提取试剂盒
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产品说明书图谱 COA 储存运输说明

PS2113 复杂多糖多酚植物/真菌基因组DNA快速提取试剂盒 (普西唐-psaitong)

产品简介：

本产品采用复杂植物/真菌样品DNA抽提液（添加多种针对植物/真菌特点的多糖、多酚、淀粉去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质杂质，然后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过多次漂洗，进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
本产品适用于提取各种复杂多糖多酚淀粉类植物和复杂真菌基因组DNA等。

操作步骤：

使用前请先在去蛋白液PE、结合液PQ和漂洗液WB瓶中加入无水乙醇，加入体积请参照说明书/瓶上的标签。
取600 µl裂解液PF至离心管内(如果PF气温低有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解），在600 µl裂解液PF中加入12 μl β-巯基乙醇（ β-巯基乙醇的终浓度约为2%）。颠倒混匀后65°C水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。
1：取适量植物组织（新鲜组织100 mg 或干重组织30 mg，可适当多取一些样品弥补粘在研钵上的损失）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
2：将研磨好的粉末迅速转移到预先装有600 µl 65°C预热裂解液PF的离心管中（确认裂解液PF中已经加入了β-巯基乙醇），迅速颠倒混匀后，加入5 μl RNase A（10 mg/ml），将离心管放在65°C水浴20-30 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
如果组织干燥或者产量低，可以适当延长水浴时间至1 h。
如果提取的DNA残留RNA较多导致电泳时候条带拖尾，条带扭曲，背景很高等不正常电泳情况，可以加1% RNase A（10 mg/ml），37°C或者室温放置20 min即可消化RNA，消化完后不需要特殊处理便可直接用于PCR或者酶切。
3：加入700 µl氯仿，充分混匀，13, 000 rpm 离心5 min。
可选步骤（一般不需要）：若提取富含多糖多酚或淀粉植物，可在第3步前，用Tris饱和酚（PH8.0）/氯仿（1：1）等体积抽提一遍。
如果没有氯仿，可以购24：1(PS1168)。
4：小心吸取上清（约600 µl）到一个新的离心管。加入1.5倍体积结合液PQ（请先检查是否已加入无水乙醇!）后立刻涡旋，充分混匀。
5：将混匀的液体转入吸附柱AC中，13,000 rpm 离心30 sec，弃掉废液。（吸附柱容积为700 µl左右，可分次加入离心。）
6：加入500 μl去蛋白液PE（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm离心30 sec，弃废液。
7：加入600 μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm离心30 sec，弃掉废液。
8：重复操作步骤7。
9：将吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟。尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10：取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50-100 μl洗脱缓冲液EB，室温放置3分钟，13,000 rpm 离心1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2 min，13, 000 rpm离心1 min。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低洗脱效率，减少DNA产量（最小不应少于30 µl）。
如追求最高产量，洗脱缓冲液事先在 80-100°C水浴中预热后再加可以提高产量。

附录（低DNA含量或者产量低样品操作步骤）：
1：取适量植物组织（新鲜组织500 mg 或干重组织200 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
2：转移细粉到一个15 ml离心管，不要解冻，加入9 ml 65°C预热的裂解液PF (确认已经加入β-巯基乙醇至终浓度2%)，剧烈涡旋振荡混匀，用大口径枪头吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
3：室温放置1h，中间不时颠倒离心管以混合样品数次。
如果组织干燥或者产量低，可以放置在65°C水浴。
4：加4.5 ml氯仿，涡旋充分混匀，3,000×g 离心10 min。
5：小心吸取上清到一个新的15ml离心管，注意不要吸到界面物质。重复一遍步骤4。
6：小心吸取上清到一个新的15 ml离心管，估算上清量，加入0.7倍体积的异丙醇，涡旋混匀来沉淀DNA。
7：立刻3,000 ×g 离心20 min沉淀DNA，弃上清，颠倒离心管口放在纸巾上控干残留液体，并小心用用移液器吸干沉淀周围残留液体（不要过于干燥DNA沉淀）。
8：加入300 μl-400 μl预热到65°C的灭菌水和3 μl RNA酶，重新溶解DNA，可能需要在65°C短暂温育帮助溶解，期间不断轻弹管底帮助溶解。
9：加入1.5倍体积结合液PQ（450μl-600μl，请先检查是否已加入无水乙醇!）后立刻涡旋，充分混匀。
10：后续步骤和上面标准操作步骤5开始后完全一样。

产品特点：

1：离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2：适用极其广泛，可以高质量提取绝大多数样品包括最复杂的多糖多酚，淀粉种子类样品。
3：操作简捷，单个样品操作一般可在30分钟完成。
4：数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达20 kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

组分：

试剂盒组成	50T	100T	保存
RNase A	250 μL	500 μL	4°C
裂解液PF	30 mL	60 mL	室温
结合液PQ	18 mL(第一次使用前加入36ml的无水乙醇)	35 mL(第一次使用前加入70ml的无水乙醇)	室温
去蛋白液PE	16 mL(第一次使用前加入10ml的无水乙醇)	32 mL(第一次使用前加入20ml的无水乙醇)	室温
漂洗液WB	13 mL(第一次使用前加入52ml的无水乙醇)	25 mL(第一次使用前加入100ml的无水乙醇)	室温
洗脱缓冲液EB	10 mL	10 mL	室温
吸附柱AC	50个	100个	室温
收集管	50个	100个	室温

1：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
2：裂解液PF冬天低温时可能出现析出和沉淀，可以在55°C水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后轻轻充分混匀冷却到室温即可使用。
3：避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

保存条件：

室温，12个月。

注意事项：

1：所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13, 000 rpm 的传统台式离心机。
2：开始实验前将需要的水浴先预热到65°C备用。
3：需要自备氯仿、无水乙醇和β-巯基乙醇。
4：不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般100 mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。
5：洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20°C。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
6：本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积，如果样品DNA含量低或者产量低，需要扩大提取量，还需要另外购买溶液。

UN码：

HazardClass：

危害声明：

安全说明：

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