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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | TRUEscript RT kit (+gDNA Eraser) 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | TRUEscript RT kit (+gDNA Eraser) | ||||
| 别名: | 基因组清除反转录/荧光定量用 | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
本产品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组DNA污染的反转录系统。试剂盒采用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶，大幅度提高了稳定性和反转录效率。本试剂盒为一管式反转录预混Mix，5×TRUE RT MasterMix中含有反转录第一链合所需的所有试剂(TRUEscriptHˉRTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer)。通常RealTimeRT-PCR等实验需要先用DNaseI消化去除RNA中残留的基因组DNA(gDNA)，但是传统DNaseI处理复杂并容易造成RNA的降解和损失。本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊4×gDNAEraserMix2分钟消除gDNA残留，不需要DNase消化和后续繁琐步骤。
产品适用于第一链cDNA合成和高拷贝、低拷贝基因的检测。
产品适用于第一链cDNA合成和高拷贝、低拷贝基因的检测。
操作步骤：
一：(以20 μl反应体系为例，也可以采用10μl反应体系)
1：将模板RNA和5 × TRUE RT MasterMix 在冰上解冻;4 × gDNA Eraser Mix 和RNase free H2O 在室温(15-25°C)解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2：在RNAse free管里面加入表1成分:(建议使用PCR管冰上配制)
3：移液器轻轻吹打混匀，42°C孵育2分钟(或者37°C孵育5分钟)。控温步骤均建议PCR仪器上进行。
4：继续直接在同一管加入表2成份:
5：移液器轻轻吹打混匀(总体积20 μl)
如使用mRNA模板是来源于真核细胞(如人、小鼠的组织细胞)含有Poly(A)尾结构，42°C孵育15-20min。 如使用mRNA模板是来源于原核细胞(细菌)或者病毒等不含Poly(A)尾结构，25°C孵育10 min，42°C孵育 15-20min。
注意:如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至50°C，有助于提高产量。
6：85°C加热 5 sec 失活TRUEscript Hˉ RTase和gDNA Eraser。
7：得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA应避免反复冻融。
二：RT-qPCR
取适量反转录cDNA产物(一般不超过qPCR反应体积的1/10)作为qPCR模板，按照厂家荧光定量PCR试剂说 明书进行下一步荧光定量PCR。 如果表达基因含量丰富，可以根据实际适当稀释cDNA模板使用。
1：将模板RNA和5 × TRUE RT MasterMix 在冰上解冻;4 × gDNA Eraser Mix 和RNase free H2O 在室温(15-25°C)解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2：在RNAse free管里面加入表1成分:(建议使用PCR管冰上配制)
3：移液器轻轻吹打混匀，42°C孵育2分钟(或者37°C孵育5分钟)。控温步骤均建议PCR仪器上进行。
4：继续直接在同一管加入表2成份:
5：移液器轻轻吹打混匀(总体积20 μl)
如使用mRNA模板是来源于真核细胞(如人、小鼠的组织细胞)含有Poly(A)尾结构，42°C孵育15-20min。 如使用mRNA模板是来源于原核细胞(细菌)或者病毒等不含Poly(A)尾结构，25°C孵育10 min，42°C孵育 15-20min。
注意:如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至50°C，有助于提高产量。
6：85°C加热 5 sec 失活TRUEscript Hˉ RTase和gDNA Eraser。
7：得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA应避免反复冻融。
二：RT-qPCR
取适量反转录cDNA产物(一般不超过qPCR反应体积的1/10)作为qPCR模板，按照厂家荧光定量PCR试剂说 明书进行下一步荧光定量PCR。 如果表达基因含量丰富，可以根据实际适当稀释cDNA模板使用。
| 表1 | |
| Components | Volume |
| Total RNA/mRNA | ≤ 12 μl * |
| 4 × gDNA Eraser Mix | 4 μl (见注意事项 3) |
| RNase free H2O | to 16 μl(补足到总体积 16 μl) |
| *Total RNA 建议不超过 2 μg，mRNA 不超过 200 ng (20μl 体系) | |
| 表2 | |
| Components | Volume |
| 5 ×TRUE RT MasterMix | 4 μl (见注意事项 3) |
产品特点：
1：新一代反转录酶大幅度提高了稳定性和反转录效率。
2：采用gDNAEraser仅需2分钟清除DNA残留，不需要DNase 消化和后续繁琐步骤。
3：全预混的反转录Mix，只需加入RNA和水，15分钟简单快速完成反转录。
4：同时2种Mix在-20°C不易冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
5：本产品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。
2：采用gDNAEraser仅需2分钟清除DNA残留，不需要DNase 消化和后续繁琐步骤。
3：全预混的反转录Mix，只需加入RNA和水，15分钟简单快速完成反转录。
4：同时2种Mix在-20°C不易冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
5：本产品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。
保存条件：
-20°C
注意事项：
1：避免RNase污染。
2：为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3：4 × gDNA Eraser Mix 、5 × TRUE RT MasterMix 非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。4×gDNAEraserMix 和5×TRUERTMasterMix内包含的酶均为过量，即使每次按照3.6 μl-3.8 μl使用，也不影响使用效果。
4：可以不经过基因组去除步骤，直接用5 ×TRUE RT MasterMix 进行反转录，这样所得到的结果会与使用TRUEscript RT MasterMix相当。
2：为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3：4 × gDNA Eraser Mix 、5 × TRUE RT MasterMix 非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。4×gDNAEraserMix 和5×TRUERTMasterMix内包含的酶均为过量，即使每次按照3.6 μl-3.8 μl使用，也不影响使用效果。
4：可以不经过基因组去除步骤，直接用5 ×TRUE RT MasterMix 进行反转录，这样所得到的结果会与使用TRUEscript RT MasterMix相当。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
