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（ 母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们客服联系。| 中文名称: | TRUEscript RT MasterMix( for real time PCR) 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | TRUEscript RT MasterMix( for real time PCR) | ||||
| 别名: | 第一链反转录预混合Mix/荧光定量用 | ||||
| CAS No: | |||||
| CAS No: | |||||
产品简介：
本产品以RNA为模板，采用预混合技术，用5×TRUEReactionMix(已经预混合了TRUEscript
HˉRTase、RNaseInhibitor、dNTPMixture、Buffer)高效合成第一链cDNA，操作简单。本制品采用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊gDNARemover，只需一步操作，即可同时完成基因组清除与逆转录反应，极大简化了操作步骤，避免了复杂加样过程造成的样品污染与RNA降解的风险。
本产品适用于第一链cDNA合成和高拷贝、低拷贝基因的克隆和检测。
本产品适用于第一链cDNA合成和高拷贝、低拷贝基因的克隆和检测。
操作步骤：
一：引物选择
1：如果模板为真核生物来源，一般情况下首选Oligo (dT)，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高 产量的全长cDNA。
2：如果对一些物种，不能确定mRNA是否有polyA尾的情况下，首选Oligo (dT)，不成功再尝试基因特异性引 物(GSP)和Random primer为引物。
3：基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合 成，可改用Oligo (dT)或Random primer重新进行逆转录。
4：Random primer特异性最低，所有RNA，包括mRNA，rRNA，tRNA均可以作为Random primer的模板。 当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo (dT)或基因特异性引 物(GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random primer为引物。
5：如果合成cDNA下游用于荧光定量PCR，可将Oligo (dT)与Random primer混合使用(各加1μl/20μl反应体 系)，可使mRNA的各个区域cDNA合成效率相同，有助于提高定量结果的真实性和重复性。
二：第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例)
1：加入表1成分(使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心收集液体到管底。)
2：轻轻混匀
如用Oligo(dT)或基因特异引物(GSP)，42°C孵育30-50 min(如产物用于qPCR，42°C孵育15 min) 如用Random Primer，25°C孵育10 min，42°C孵育30-50 min(如产物用于qPCR，42°C孵育15 min) 注意:如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至50°C，有助于提高产量。
3：85°C加热5 sec失活TRUEscript Hˉ RTase。
4：得到的cDNA产物可立即用于PCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA应避免反复冻融。
三：RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。丰度高的可以酌情适当稀释cDNA后使用。
四：建议PCR条件
请按照选择的PCR试剂说明书进行。
1：如果模板为真核生物来源，一般情况下首选Oligo (dT)，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高 产量的全长cDNA。
2：如果对一些物种，不能确定mRNA是否有polyA尾的情况下，首选Oligo (dT)，不成功再尝试基因特异性引 物(GSP)和Random primer为引物。
3：基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合 成，可改用Oligo (dT)或Random primer重新进行逆转录。
4：Random primer特异性最低，所有RNA，包括mRNA，rRNA，tRNA均可以作为Random primer的模板。 当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo (dT)或基因特异性引 物(GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random primer为引物。
5：如果合成cDNA下游用于荧光定量PCR，可将Oligo (dT)与Random primer混合使用(各加1μl/20μl反应体 系)，可使mRNA的各个区域cDNA合成效率相同，有助于提高定量结果的真实性和重复性。
二：第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例)
1：加入表1成分(使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心收集液体到管底。)
2：轻轻混匀
如用Oligo(dT)或基因特异引物(GSP)，42°C孵育30-50 min(如产物用于qPCR，42°C孵育15 min) 如用Random Primer，25°C孵育10 min，42°C孵育30-50 min(如产物用于qPCR，42°C孵育15 min) 注意:如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至50°C，有助于提高产量。
3：85°C加热5 sec失活TRUEscript Hˉ RTase。
4：得到的cDNA产物可立即用于PCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA应避免反复冻融。
三：RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。丰度高的可以酌情适当稀释cDNA后使用。
四：建议PCR条件
请按照选择的PCR试剂说明书进行。
| 表1 | |
| Components | Volume |
| Oligo(dT)(0.5 μg /μl) or Random Primer(0.1 μg/μl) or GSP(Gene Specific Primer, 2 pmol/μl) | 1 μl |
| 5 × TRUE Reaction Mix | 4 μl(见注意事项 4) |
| gDNA Remover * | 1 μl(见注意事项 4) |
| RNase free H2O | to 20 μl(补足到总体积 20 μl) |
| *如果反转录时不需要去除基因组DNA，直接略去gDNA Remover成分不加即可。 | |
产品特点：
1：新一代反转录酶大幅度提高了稳定性和反转录效率。合成cDNA长度高达12kb以上。
2：全预混的反转录Mix，只需加入RNA、引物和水，简单快速完成反转录。
3：gDNARemover采用先进的一步基因组清除技术，最短时间最简单完成去除基因组DNA步骤。
4：RNA模板的体积最多可加到总体积的75%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。
5：预混合Mix在-20°C不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
6：用户可根据需要，可灵活选择Oligo(dT)、Randomprimer或基因特异引物作为逆转录引物。
2：全预混的反转录Mix，只需加入RNA、引物和水，简单快速完成反转录。
3：gDNARemover采用先进的一步基因组清除技术，最短时间最简单完成去除基因组DNA步骤。
4：RNA模板的体积最多可加到总体积的75%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。
5：预混合Mix在-20°C不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
6：用户可根据需要，可灵活选择Oligo(dT)、Randomprimer或基因特异引物作为逆转录引物。
保存条件：
−20°C
注意事项：
1：避免RNase污染。
2：为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3：可选步骤(一般不需要):如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构、或者扩增cDNA长度超过3kb，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65°C变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
4：5 × TRUE Reaction Mix和gDNA Remover含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5 ×TRUE Reaction Mix内包含的酶均为过量，即使每 次按照3.6 μl-3.8 μl使用，gDNA Remover按照0.8 μl-0.9 μl也不影响使用效果。
5：本产品对标Takara产品编号：RR036A
2：为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3：可选步骤(一般不需要):如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构、或者扩增cDNA长度超过3kb，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65°C变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
4：5 × TRUE Reaction Mix和gDNA Remover含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5 ×TRUE Reaction Mix内包含的酶均为过量，即使每 次按照3.6 μl-3.8 μl使用，gDNA Remover按照0.8 μl-0.9 μl也不影响使用效果。
5：本产品对标Takara产品编号：RR036A
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
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体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO 母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清
方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
母液，添加 300 μLPEG300 混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH2O 混匀澄清方案所需的各种助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ， 玉米油 等， 均可点击跳转或在网站搜索购买。
以上为“动物实验计算换算器”的使用方法举例，并不是具体某个试剂的配制，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
剂量转换
对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考 更多
