酿酒酵母感受态制备与转化试剂盒 - CAS号查询_生物试剂_化学试剂_分析试剂

中文名称:	酿酒酵母感受态制备与转化试剂盒一键复制产品信息
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别名:	高效酵母转化试剂盒 Yeast Transformation Kit
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产品说明书

PS1381 酿酒酵母感受态制备与转化试剂盒冻存型 (普西唐-psaitong)

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操作步骤：

一、感受态细胞制备
以下方案可制备1 mL感受态,可分装为20支50μL用于小体积质粒转化，或按600 μL分装用于文库质粒转化。若只需制备少量感受态，可将步骤4中菌液(OD600值仍为 0.5-0.8) 和步骤 5、6、7 中所用试剂体积等比例缩小。同样，也可按比例扩大。
1：活化菌种。-80°C保存的菌种在YPDA培养基平板上划线，30°C培养2-4 d。
2：挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线，30°C培养2-4 d。冻存半年以内的酵母菌，活化一次即可。
3：待酵母单菌落长至直径 2 mm 时，把酵母细胞接种到3 mL YPDA 液体培养基中，30°C过夜培养。
4：第二天转接到含有 50 mL YPDA 液体培养基的三角瓶中继续培养，待OD₆₀₀达到 0.5-0.8，4000 rpm离心5 min，弃上清。
5：沉淀用30 mL的无菌的去离子水悬浮。4000 rpm离心 5 min，弃上清。
6：沉淀用1.5 mL 1×LiAc(150μL 10×LiAc Solution加1350μL无菌水)重悬后转移至1.5 mL离心管中，4000 rpm 离心 5 min，弃上清。10× LiAc Solution 经过pH缓冲，无需添加TE作为缓冲剂。
7：加入 1 mL 感受态冻存液/Y2 溶液重悬，小体积转化按照每管 50μL分装于1.5 mL无菌冻存管，转文库按600 μL 分装，感受态细胞即制备完毕，可直接用于转化或按下述方案冻存。
8：制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后，再置于-80°C冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒，或用多层纸包裹放入泡沫盒中，先置于-80°C冰箱过夜后，再取出感受态置于-80°C 冰箱，可保存一年。使用前室温融化后用于转化。
二、转化预混液配制

成分	质粒转化预混液	文库转化预混液
PEG Solution	240μL	1680μL
10 × LiAc Solution	36μL	252μL
Carrier DNA	10μL	252μL
质粒	5μL（≈200 ng/μL）	5-15μg（文库质粒）
总体积	310μL（ddH2O 补足体积）	2170μL（ddH2O 补足体积）

三、酵母质粒转化
1：将 310 μL 预混液加入 1 支感受态细胞中，反复吹吸沉淀，使酵母细胞彻底悬浮于预混液中。
2：30℃的水浴锅中孵育30min，每10 min混匀一次。
3：（加入20μL DMSO，可选）42℃的水浴锅中热击 15min，每5 min混匀一次。
4：12000 rpm 离心15s，弃上清液。
5：（可选步骤）用 1 mL YPD Plus Liquid Medium 重新悬浮，30℃摇床震荡培养 30-60min。12000rpm离心15s，弃上清液。
6：加入0.1-1 mL 无菌去离子水或 0.9%氯化钠溶液重悬沉淀（建议用 200μL液体重悬，取100μL涂布），涂筛选培养基平板，30℃培养 2-4 d。
四、酵母文库转化（需用 15-50 mL离心管）
1：将 2170 μL 预混液加入到感受态细胞（600μL）中，震荡使感受态细胞充分重悬。
2：放置在 30℃的水浴锅中孵育 50 min，每 10 min 混匀一次。
3：（加入 160 μL DMSO，可选）放置在 42℃的水浴锅中热击 20 min，每 10 min 混匀一次。
4：4000 rpm 离心 5 min，弃上清液。
5：（可选步骤）用 3 mL YPD Plus Liquid Medium 重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养 90 min，4000rpm 离心 5min，弃上清液。
6：加入 15 mL 无菌去离子水或 0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板（50 个平板左右），30℃培养 2-4 d。

组分：

组分	组分名称	规格(200T)	储存
组分1	PEG Solution	50mL	2-8°C
组分2	10×LiAc Solution	10mL	2-8°C
组分3	感受态冻存液/Y2 溶液	10mL	2-8°C
组分4	Carrier DNA	1mL×2	-20°C

保存条件：

按组分分开储存，有效期24个月。常温运输。

注意事项：

1、转化全程要求无菌操作。
2、为了保证转化效率，务必缓慢冻存感受态，感受态不宜直接用液氮冻存。
3、初次使用 Carrier DNA，建议按照实验需求进行分装，然后将装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min，然后立即放在冰上，用后-20℃储存备用。下次使用前在冰上解冻 Carrier DNA。反复冻融 3 次后需重新变性 Carrier DNA。
4、PEG 溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。
5、根据质粒浓度增减体积，增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。
6、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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危害声明：

安全说明：

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