产品简介
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称 HE 染色,是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色,细胞核内染色质的主要成分是DNA,在 DNA 的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使 DNA 双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色,改良MacConaill 铅苏木素染色液以铅盐作为氧化剂,可显示神经内分泌细胞。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。 |
组成:
产品名称 |
规格 |
Storage |
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试剂(A): MacConaill Differentiation |
100ml |
RT |
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试剂(B): MacConaill 染色液 |
B1: MacConaill 铅溶液 |
100ml |
RT 避光 |
B2: MacConaill 氧化剂 |
10ml |
RT |
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B3: MacConaill 增强剂 |
10ml |
RT 避光 |
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临用前,按 B1:B2:B3 =10:10:1 充分混匀,即配即用。 |
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试剂(C): Lea 苏木素染色液 |
20ml |
RT 避光 |
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临用前,按试剂(B):试剂(C)=1:1 充分混匀,静置 30min 后过滤,每 3ml 滤液溶解于 15ml 蒸馏水,即为 MacConaill 苏木素染色液,即配即用。 |
染色原理:
1、细胞核染色原理:苏木素为碱性天然染料,可使细胞核着色,细胞核内染色质的成分主要是 DNA,在 DNA 双螺旋结构中两条核苷酸链上的磷酸基向外,使 DNA 双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。 |
2、细胞浆染色原理:伊红是一种化学合成的酸性染料,在一定条件下可使细胞浆着色,细胞浆的主要成分是蛋白质,为两性化合物,细胞浆的染色与染液的 pH 值密切相关,当染色液 pH 值在胞浆蛋白质等电点(4.7~5.0)以下时,胞浆蛋白质以碱式电离,则细胞浆带正电荷,就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合,使细胞浆着色,呈现红色。 |
3、分化作用:染色后,用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去,这个过程称为分化作用,所用的溶液称为分化液。在 HE 染色中常用 0.5~1%盐酸乙醇作为分化液,因酸能破坏苏木素的醌型结构,使组织与色素分离而退色,大多数组织经苏木素染色后,必须用盐酸乙醇分化,使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去,再进行伊红染色,才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。 |
4、返蓝作用:分化之后,苏木素在酸性条件下处于红色离子状态,呈红色;在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色,立即用水除去组织切片上的酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色,这个过程称为返蓝作用或蓝化作用,另外用自来水(尤其是温水)浸洗也可使细胞核返蓝,但所需时间较长。 |
操作步骤(仅供参考):
1、切片脱蜡至水 |
①二甲苯或 Leagene 脱蜡透明液作用 2 次,每次 5~10min。 |
②(可选)无水乙醇作用 2 次,每次 3~5min。 |
③95%的乙醇 3~5min |
④90%的乙醇 3~5min |
⑤80%的乙醇 3~5min |
⑥自来水或蒸馏水冲洗 1~3min |
2、染色 |
①MacConaill Differentiation 分化数秒。若用福尔马林、多聚甲醛、Bouin 液固定组织,60℃分化 3~4h;若用戊二醛、Helly 液固定组织 60~65℃分化 12h。 |
②蒸馏水冲洗 5~10s |
③取配制好的 MacConaill 苏木素染色液提前预热至 37~45℃,37℃恒温浸染 2~3h 或45℃恒温浸染 1~2h。 |
④蒸馏水冲洗 5~10min |
2、脱水、透明、封固 |
①80%乙醇 10~20s |
②90%乙醇 10~20s |
③95%乙醇作用 2 次,每次 1~2min。 |
④无水乙醇作用 2 次,每次 2~3min。 |
⑤二甲苯透明 3 次,每次 2~3min。 |
⑥中性树脂封片。 |
染色结果:
内分泌细胞颗粒 |
深蓝色至黑色 |
肌肉、神经或其他组织 |
蓝色至黑色 |
注意事项:
1、如果组织是用多聚甲醛或 Helly 液固定,染色时间应适当延长。 |
2、切片脱蜡应尽量干净。 |
3、系列乙醇应经常更换新液。 |
4、冷冻切片染色时间尽量要短。 |
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
有限期:12个月有效。
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )