( 母液浓度为 40 mg/mL ), 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度,请先与我们客服联系。重组链霉亲和素与天然链霉亲和素相比,去除与活性无关的序列,仅保留与活性有关的核心序列,稳定性、溶解性等方面均优于天然SA。氨基酸序列中不含半胱氨酸,使用时不需要还原处理。
产品形式:冻干粉,冻干前溶液为 5 mM PB (4 mM Na2HPO4, 1 mM NaH2PO4, pH 7.4)溶液。
分 子 量:亚基单体 13.3 kDa; 四聚体 53.2 kDa
等 电 点:6.09
理论活性:18.3 U/mg 蛋白
活性:≥12 U/mg 蛋白(Green 改良法)
纯度:≥95%(SDS-PAGE)
A280nm(1mg/mL):3.16
内 毒 素:≤5 EU/mg
来源:大肠杆菌
储存:-20℃
有效期:大于三年
1、用碳酸钠缓冲溶液(pH 9.6)溶解冻干粉,将浓度稀释成 3-10ug/ml(可设定梯度进行实验)。
注意:SA 等电点是 6.0。
2、用移液器吸取 100ul/孔,4℃过夜包被或者 37℃包被 3h。
3、洗涤:倒尽板孔中液体,加 200ul 洗涤液,静放三分钟,反复三次,最后将反应板倒置在吸水纸 上,使孔中洗涤液流尽,扣干。
4、后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程。
5、若不立即进入下游实验,包被板需要进行烘干保存。包被前,将包被液中加入 20%蔗糖作为活性 保护剂。
二:偶联磁珠(以羧基磁珠为例)
1:磁珠表面羧基活化
A:混匀磁珠后,取 100 µL 羧基磁珠到 1mL 离心管中,磁性分离去除上清液,用 200 µL MEST 溶液(100 mM MES,pH 5.0,0.05% Tween 20)进行磁性分离洗涤 2 次,然后移除上清液。
B:迅速加入新鲜配制的 100 µL EDC 溶液(10 mg/mL,以上述 MEST 溶液作分散剂)和 100 µL NHS(10 mg/mL,以上述 MEST 溶 液作分散剂)溶液到装有磁珠的离心管中,漩涡混匀使磁珠充分悬浮, 25℃活化 30 min,该期间保持磁珠的悬浮状态(可利用 垂直混合仪进行颠倒混匀);经过上述步骤之后,磁珠表面的羧基已经活化,可以与带有伯氨基的生物配体进行共价偶联。(活 化状态不宜长时间保存,建议立即进行偶联)。
2:磁珠与生物配体的共价偶联
A:磁性分离去除上清液,加入 50 µg~200 µg 生物配体(合适用量及浓度需要根据具体实验进行优化,保持溶液 pH≈8.0,可加 入 0.05% Tween 20 以提高磁珠分散性,避免缓冲体系中存在除生物配体以外含有伯氨基的试剂),轻柔地混匀。
B:25℃偶联 2 h,或 25℃偶联 1h 后放置 4℃静置过夜,偶联期间保持磁珠的悬浮状态(可利用垂直混合仪进行颠倒混匀);
C:离心管置于磁性分离架上磁性分离去除上清液,加入 200µL PBST 溶液(pH 7.2,且含 1%BSA)重悬磁珠(可根据需要进行超 声),25℃反应 1h 封闭磁珠表面未反应的活化羧基基团,期间保持磁珠的悬浮状态(可利用垂直混合仪进行颠倒混匀);
D:离心管置于磁性分离器上磁性分离去除上清液,每次用 200 µL PBS 溶液(pH 7.2)或保存溶液洗涤 3 次后, 重新悬浮于保 存溶液中(可根据需要来确定保存溶液的加入量,以调整偶联配体磁珠的浓度),保存于 4℃。如果固定的生物配体稳定,可以 在保存溶液中加入 0.02%(w/v)叠氮化钠(NaN3)作为抑菌剂。 具体实验步骤可根据实验需求进行调整。
2、如果观察到未溶解的物质,可以通过离心将其除去,不会对总蛋白产生很大的影响。
3、较宽的 pH 和温度范围内链霉亲和素-生物素复合物的结构是比较稳定的。复合物通常仅在导致蛋 白质不可逆变性的条件下被变坏。生物素类似物(例如 2-亚氨基生物素)与蛋白质可逆结合,在高 pH: >9.5 下形成复合物,在低 pH<4 下解离。
4、冻干粉溶解后应避免反复冻融,建议分装成小包装后分别冻存。
5、溶解后立即使用效果最好,不能 4°C 长期存放。
6、若用于 ELISA 或 CLIA 固相载体包板和硝酸纤维素膜划线包被,需要烘干保存的,包被液或缓 冲 液中需加入 20%蔗糖作为活性保护剂
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
母液,添加 300 μLPEG300
混匀澄清,再加 50μLTween80, 混匀澄清,再加 600μLSaline/PBS/ddH2O
混匀澄清方案所需的各种助溶剂如: DMSO , PEG300 / PEG400 , Tween 80 , SBE-β-CD , 玉米油 等, 均可点击跳转或在网站搜索购买。
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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