产品简介：
用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA。独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞释放出RNA，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNasefreeH20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
操作步骤：
1：修整去除过量包埋组织外石蜡，并切片成5-20μm厚切片(开始的2-3片抛弃不用)。
2：收集总厚度不超过■40μm的石蜡切片到一个1.5-2ml离心管(例如2片20μm、4片10μm、8片5μm的石蜡切片)，或者不超过▲80μm的石蜡切片到一个2ml离心管。
■代表处理切片总厚度≤40μm，▲代表处理切片总厚度≤80μm
3：加入1ml100%二甲苯，涡旋振荡10秒。瞬间离心把组织全部浸入到二甲苯。
4：50°C水浴3分钟熔解石蜡，20-25°C最高速离心2分钟，收集组织到管底。
5：小心用移液器吸弃上清二甲苯，注意不要吸到沉淀。
6：加入1ml无水乙醇，涡旋振荡，最高速离心2分钟，小心吸弃上清乙醇。
7：加入1ml无水乙醇，重复步骤6一遍，尽可能吸弃所有乙醇。
8：室温或者37°C晾干乙醇10分钟或直到所有乙醇挥发干。
乙醇完全晾干非常重要，微量的乙醇残留也会导致RNA产量降低。
9：重悬吹打或者涡旋振荡充分重悬组织沉淀在■150μl▲240μl裂解液PKD中，短暂离心收集液体到管底，加10μl蛋白酶K，吹打混匀。
10：55°C孵育15分钟，然后80°C孵育15分钟。
55°C孵育后，可以将离心管取出放置在室温，等水浴锅温度升到80°C后再放入水浴锅，精确的孵育15分钟。即使2分钟的延长也可能导致RNA的部分降解。
11：加入■320μl▲500μl结合液RBC，充分吹打混匀调节结合条件。
12：立刻将混合物加入一个基因组DNA清除柱中，(清除柱放入收集管中)14,000rpm离心60秒，保留滤过液(RNA在滤过液中)。
应避免吸到可能有的较大的未消化完全的絮团物质上柱子，以免堵塞离心柱。
13：加入■720μl▲1200μl无水乙醇到滤过液中，立即吹打混匀，不要离心。
14：立刻将混合物(每次小于700μl，多可以分多次加入)加入一个RNA吸附柱RA中，(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30秒，弃掉废液。
15：加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。
16：将吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
17：取出吸附柱RA，放入一个RNasefree离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30μlRNasefreewater(事先在70-90°C水浴中加热可提高产量)，室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，如果需要RNA浓度高，可以将洗脱液放回吸附柱RA，再洗脱一遍。
2：收集总厚度不超过■40μm的石蜡切片到一个1.5-2ml离心管(例如2片20μm、4片10μm、8片5μm的石蜡切片)，或者不超过▲80μm的石蜡切片到一个2ml离心管。
■代表处理切片总厚度≤40μm，▲代表处理切片总厚度≤80μm
3：加入1ml100%二甲苯，涡旋振荡10秒。瞬间离心把组织全部浸入到二甲苯。
4：50°C水浴3分钟熔解石蜡，20-25°C最高速离心2分钟，收集组织到管底。
5：小心用移液器吸弃上清二甲苯，注意不要吸到沉淀。
6：加入1ml无水乙醇，涡旋振荡，最高速离心2分钟，小心吸弃上清乙醇。
7：加入1ml无水乙醇，重复步骤6一遍，尽可能吸弃所有乙醇。
8：室温或者37°C晾干乙醇10分钟或直到所有乙醇挥发干。
乙醇完全晾干非常重要，微量的乙醇残留也会导致RNA产量降低。
9：重悬吹打或者涡旋振荡充分重悬组织沉淀在■150μl▲240μl裂解液PKD中，短暂离心收集液体到管底，加10μl蛋白酶K，吹打混匀。
10：55°C孵育15分钟，然后80°C孵育15分钟。
55°C孵育后，可以将离心管取出放置在室温，等水浴锅温度升到80°C后再放入水浴锅，精确的孵育15分钟。即使2分钟的延长也可能导致RNA的部分降解。
11：加入■320μl▲500μl结合液RBC，充分吹打混匀调节结合条件。
12：立刻将混合物加入一个基因组DNA清除柱中，(清除柱放入收集管中)14,000rpm离心60秒，保留滤过液(RNA在滤过液中)。
应避免吸到可能有的较大的未消化完全的絮团物质上柱子，以免堵塞离心柱。
13：加入■720μl▲1200μl无水乙醇到滤过液中，立即吹打混匀，不要离心。
14：立刻将混合物(每次小于700μl，多可以分多次加入)加入一个RNA吸附柱RA中，(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30秒，弃掉废液。
15：加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。
16：将吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
17：取出吸附柱RA，放入一个RNasefree离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30μlRNasefreewater(事先在70-90°C水浴中加热可提高产量)，室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，如果需要RNA浓度高，可以将洗脱液放回吸附柱RA，再洗脱一遍。
产品特点：
1：完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2：快速，简捷，单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。
3：试剂盒的独家基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4：多次柱漂洗确保RNA高纯度，可直接用于下游各种实验。
2：快速，简捷，单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。
3：试剂盒的独家基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4：多次柱漂洗确保RNA高纯度，可直接用于下游各种实验。
组分：
| 组分名称 | 50T | 储存 |
| 裂解液 PKD | 15mL | RT |
| 结合液 RBC | 25mL | RT |
| 漂洗液 RW(初次使用前请按瓶标说明加入指定量的无水乙醇) | 10mL | RT |
| 蛋白酶 K(20mg/ml) | 1mL | -20℃ |
| RNase-Free H2O | 10mL | RT |
| 基因组 DNA 清除柱和收集管 | 50EA | RT |
| RNA 吸附柱 RA 和收集管 | 50EA | RT |
注意事项：
1：所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。
2：样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如不超过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3：裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4：预防RNase污染。
5：关于DNA的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase消化也无法做到100%无残留)，但绝大多数DNA已经被清除，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时:选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应；选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
6：RNA纯度及浓度检测：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE电泳缓冲液;150v，15分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA与蛋白反应交联会导致RNA断裂或者降解，一般电泳后UV下只能看到模糊弥散(smear)带型，随着储存的时间越长，降解断裂越严重，甚至只能看到峰值仅仅在100bp左右的模糊条带。这都属于RNA提取正常情况。
纯度:OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数(10mMTris,pH7.5)在1.8-2.1之间。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mMTris，pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度:取一定量的RNA提取物，用RNase-free水稀释n倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260,OD280测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)=(OD260)×(稀释倍数n)×40。
2：样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如不超过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3：裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4：预防RNase污染。
5：关于DNA的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase消化也无法做到100%无残留)，但绝大多数DNA已经被清除，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时:选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应；选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
6：RNA纯度及浓度检测：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE电泳缓冲液;150v，15分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA与蛋白反应交联会导致RNA断裂或者降解，一般电泳后UV下只能看到模糊弥散(smear)带型，随着储存的时间越长，降解断裂越严重，甚至只能看到峰值仅仅在100bp左右的模糊条带。这都属于RNA提取正常情况。
纯度:OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数(10mMTris,pH7.5)在1.8-2.1之间。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mMTris，pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度:取一定量的RNA提取物，用RNase-free水稀释n倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260,OD280测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)=(OD260)×(稀释倍数n)×40。
保存条件：
室温运输，按说明书保存 。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
