( 母液浓度为 40 mg/mL ), 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度,请先与我们客服联系。| 中文名称: | RBC裂解缓冲液 一键复制产品信息 | ||||
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| 英文名称: | RBC lysis buffer | ||||
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利用红细胞与有核细胞膜结构的差异。在低渗的铵盐溶液中,红细胞因渗透压作用迅速吸水膨胀而破裂,而有核细胞能耐受短时间的低渗处理,从而被选择性保留。
将新鲜抗凝全血或单细胞悬液转移至离心管中。
二、洗涤
加入适量PBS(如3-5倍体积),轻柔混匀,300-500 g,4°C离心5分钟。小心弃去上清,留下细胞沉淀。
三、裂解
向细胞沉淀中加入预冷的1×裂解工作液(体积至少为原血样体积的3-5倍,例如1mL血加3-5mL裂解液)。立即摇动或颠倒,确保细胞完全重悬。
四、孵育
将重悬液在冰上孵育10-15分钟。期间可轻柔颠倒混匀1-2次。裂解时间需优化,可见溶液由红色逐渐变为澄清的深红色直至透明。
五、终止裂解
立即加入大量PBS或完全培养基(至少为裂解液体积的2倍),混匀以终止反应。
六、洗涤(备选 )
300-500 g,4°C离心5分钟。弃去红色上清(含血红蛋白),可见白色或淡黄色的有核细胞沉淀。
七、重复洗涤:
如果沉淀仍发红,可重复步骤3-6一次(但孵育时间应缩短至5分钟左右)。通常洗涤1-2次即可。
八、重悬
用适量的预冷PBS或后续实验所需缓冲液重悬细胞沉淀,计数并用于下游实验。
由10mM Tris HCl和150mM氯化铵等组成。
用于流式细胞术分析和细胞培养。红细胞溶解缓冲液已被开发用于杂交瘤方案,在融合前从小鼠脾细胞悬浮液中去除红细胞。它也适用于需要从细胞悬浮液中去除红细胞的系统,如全血。
2、现配现用:1×工作液建议现用现配,以确保最佳裂解效率。
3、时间优化:裂解时间是关键。时间不足会导致红细胞去除不彻底;时间过长会损伤有核细胞,降低得率和活性。不同来源样本(人、小鼠、大鼠)的最佳时间可能不同,需通过预实验优化。
4、离心力控制:切勿使用过高离心力,否则会导致细胞损伤或结团。
5、效果验证:可通过台盼蓝染色计数评估细胞活性,或使用细胞计数仪分析残留红细胞比例。
6、本裂解液已经过0.22 um滤膜过滤,为无菌溶液,为保证开封后的稳定性,建议超净台内操作取用。另外,试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
分析证书(COA)
Lot/Batch Number
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
母液,添加 300 μLPEG300
混匀澄清,再加 50μLTween80, 混匀澄清,再加 600μLSaline/PBS/ddH2O
混匀澄清方案所需的各种助溶剂如: DMSO , PEG300 / PEG400 , Tween 80 , SBE-β-CD , 玉米油 等, 均可点击跳转或在网站搜索购买。
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL Saline/PBS/ddH2O,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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