| 中文名称: | Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 一键复制产品信息 | ||||
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| 英文名称: | |||||
| CAS No: | 分子式: | 分子量: | |||
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产品简介：
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis， SDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变 性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋 白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。Tricine-SDS-PAGE 电泳能够较好的分离10KD 以下的蛋白或多肽，是电泳法分离多肽的主要方法，30T一般可以配制30～35 块胶，具体配制的量应根据器具大小决定。电泳分离后可直接考马斯亮蓝染色、银染等。
附表 Tricine-SDS-PAGE凝胶配方表
附表 Tricine-SDS-PAGE凝胶配方表
| 成分 | 分离胶 | 夹层胶 | 浓缩胶 | ||
| 浓度/体积 | 20%/4.5ml 染液 A | 16.5%/4.5ml | 15.5%/4.5ml | 0.407ml | 0.16ml |
| 49.5%T 3%C | -- | -- | -- | 0.407ml | 0.16ml |
| 49.5%T 6%C | 1.82ml | 1.5ml | 1.395ml | -- | -- |
| Gel buffer | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml | 0.667ml | 0.496ml |
| Glycerol | 0.48mL | 0.48mL | 0.48mL | -- | -- |
| 蒸馏水 | 0.7ml | 1.02ml | 1.125ml | 0.926ml | 1.344ml |
| 10%APS | 40μl | 40μl | 40μl | 20μl | 20μl |
| TEMED | 5μl | 5μl | 5μl | 3μl | 3μl |
操作步骤：
1、 配制10%过硫酸铵(APS)：直接在0.3g Ammonium Persulfate 中加入蒸馏水，充分 溶解，分装成小份储存于-20℃或4℃。
2、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制分离胶：
①将不同体积的蒸馏水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol 加入到离心管中充分混合。
②加入10%APS 和TEMED，立即涡旋混匀，以使溶液充分混匀。
③在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm mini-gel，分离胶溶液加约4ml），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层的水层，使凝胶表面保持平整。
④静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
3、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制夹层胶：
①去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
②将不同体积的蒸馏水、49.5%T 3%C 和Gel buffer 加入到离心管中混合。
③加入10%APS 和TEMED，立即涡旋混匀，以使溶液充分混匀。
④将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面，然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层 的水层，使凝胶表面保持平整。
⑤静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
4、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制浓缩胶：
①去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
②将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和Gel buffer 加入到离心管中混合。
③加入10%APS 和TEMED，立即涡旋混匀，以使溶液充分混匀。
④将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
⑤静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。进行电泳操作。
5、 电泳
将电泳槽置于4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V 预电泳10 min，将处理好的样品加入点样孔，30V 电泳1h，100V 电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
2、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制分离胶：
①将不同体积的蒸馏水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol 加入到离心管中充分混合。
②加入10%APS 和TEMED，立即涡旋混匀，以使溶液充分混匀。
③在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm mini-gel，分离胶溶液加约4ml），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层的水层，使凝胶表面保持平整。
④静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
3、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制夹层胶：
①去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
②将不同体积的蒸馏水、49.5%T 3%C 和Gel buffer 加入到离心管中混合。
③加入10%APS 和TEMED，立即涡旋混匀，以使溶液充分混匀。
④将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面，然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层 的水层，使凝胶表面保持平整。
⑤静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
4、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制浓缩胶：
①去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
②将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和Gel buffer 加入到离心管中混合。
③加入10%APS 和TEMED，立即涡旋混匀，以使溶液充分混匀。
④将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
⑤静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。进行电泳操作。
5、 电泳
将电泳槽置于4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V 预电泳10 min，将处理好的样品加入点样孔，30V 电泳1h，100V 电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
组分：
| 产品名称 | 规格30T | Storage |
| 试剂(A): 49.5%T 3%C | 20ml | 4℃ |
| 试剂(B): 49.5%T 6%C | 60ml | 4℃ |
| 试剂(C): Gel buffer | 90ml | 4℃ |
| 试剂(D): Glycerol | 20ml | RT |
| 试剂(E): Ammonium Persulfate | 0.3g | RT |
| 试剂(F): TEMED | 2ml | 4℃ 避光 |
保存条件：
4℃,避光,6个月
注意事项：
1、 过硫酸铵配制成10%APS溶液后应当-20℃保存，用2~3 次，亦可4℃保存几天。
2、 TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
3、 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于37℃放置，加速凝固。在液体混 匀的时候应尽量避免气泡的产生。
4、 在分离胶上层加蒸馏水时要缓慢，速度不宜过快。
5、 49.5%T 3%C 和49.5%T 6%C 为不同比例的Acr-Bis，有轻微神经毒性，请小心操作。
2、 TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
3、 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于37℃放置，加速凝固。在液体混 匀的时候应尽量避免气泡的产生。
4、 在分离胶上层加蒸馏水时要缓慢，速度不宜过快。
5、 49.5%T 3%C 和49.5%T 6%C 为不同比例的Acr-Bis，有轻微神经毒性，请小心操作。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
