产品简介：
鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin 结合，通常用来标记组织切片，细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin 进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I 等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1μg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin 的ATP 水解活性。
本品为Fluor 594标记的鬼笔环肽，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。另外，经本品结合后的F-actin 仍能维持actin 自身具有的许多生物学特性。 且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。
本产品为黄色冻干粉形式。最大激发/发射波长（Ex/Em）Ex581nm； Em609nm。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1μg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin 的ATP 水解活性。
本品为Fluor 594标记的鬼笔环肽，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。另外，经本品结合后的F-actin 仍能维持actin 自身具有的许多生物学特性。 且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。
本产品为黄色冻干粉形式。最大激发/发射波长（Ex/Em）Ex581nm； Em609nm。
操作步骤：
一：染色液的配置
1：母液的配置：使用前将本品回温至室温并简短离心，加入30uL DMSO使其充分溶解，混匀即可获得1000×FLUOR 594标记鬼笔环肽母液。根据实验情况，对其分装并于-20℃避光干燥保存。
2：吸取1 µL以上FLUOR 594标记鬼笔环肽母液至1 mL PBS（含1%BSA）缓冲液中即可得到1×工作液。
【注】：不同的细胞染色情况不同，相应 FLUOR 594鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。推荐工作浓度为：80-200 nM。工作液现配现用。
二：染色步骤 1：细胞爬片生长>24h，使其密度达到50-60%汇合度。
2：吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。
3：使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10-30min。
避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
4：室温条件下，用PBS 清洗细胞2-3 次，每次10min。
5：室温条件下，用丙酮（≤-20℃）脱水或者用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min。
6：室温条件下，用PBS清洗细胞2-3次，每次10min。
7：取100µL/孔（96孔板）配制好的FLUOR 594标记鬼笔环肽工作液，覆盖住盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min（通常情况下，4℃-37℃孵育皆可）。
注意：为了降低背景，可于FLUOR 594标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA；另外，孵育过程中为了避免溶液挥发，可将盖玻片转移到一个密封的容器内。
8：用PBS清洗盖玻片3次，每次5min。
9：使用100 µL/孔（96孔板）即用型DAPI溶液（浓度：100 nM）对细胞核进行复染，约30s。
10：用PBS清洗盖玻片，然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂，然后用指甲油永久封片。
此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存，通常6个月内可继续做F-actin染色分析。
11：荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择 SUPER FLUOR 594 激发/发射滤片（Ex/Em=581/609 nm）和 DAPI 激发/发射滤片（Ex/Em=364/454 nm）。
1：母液的配置：使用前将本品回温至室温并简短离心，加入30uL DMSO使其充分溶解，混匀即可获得1000×FLUOR 594标记鬼笔环肽母液。根据实验情况，对其分装并于-20℃避光干燥保存。
2：吸取1 µL以上FLUOR 594标记鬼笔环肽母液至1 mL PBS（含1%BSA）缓冲液中即可得到1×工作液。
【注】：不同的细胞染色情况不同，相应 FLUOR 594鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。推荐工作浓度为：80-200 nM。工作液现配现用。
二：染色步骤 1：细胞爬片生长>24h，使其密度达到50-60%汇合度。
2：吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。
3：使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10-30min。
避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
4：室温条件下，用PBS 清洗细胞2-3 次，每次10min。
5：室温条件下，用丙酮（≤-20℃）脱水或者用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min。
6：室温条件下，用PBS清洗细胞2-3次，每次10min。
7：取100µL/孔（96孔板）配制好的FLUOR 594标记鬼笔环肽工作液，覆盖住盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min（通常情况下，4℃-37℃孵育皆可）。
注意：为了降低背景，可于FLUOR 594标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA；另外，孵育过程中为了避免溶液挥发，可将盖玻片转移到一个密封的容器内。
8：用PBS清洗盖玻片3次，每次5min。
9：使用100 µL/孔（96孔板）即用型DAPI溶液（浓度：100 nM）对细胞核进行复染，约30s。
10：用PBS清洗盖玻片，然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂，然后用指甲油永久封片。
此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存，通常6个月内可继续做F-actin染色分析。
11：荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择 SUPER FLUOR 594 激发/发射滤片（Ex/Em=581/609 nm）和 DAPI 激发/发射滤片（Ex/Em=364/454 nm）。
自备材料：
●甲醇
●1×PBS 缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别
●固定液4%多聚甲醛（溶于PBS 缓冲液）
●丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS 缓冲液）
●Fluoromount-GTM 水溶性封片剂（不含DAPI） ，DAPI
●DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片剂（含DAPI）
●BSA，标准级别
●载玻片和盖玻片
●盖玻片周围密封液（如透明指甲油）
●组装有Fluor 594激发/发射滤片，以及DAPI 激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。
●1×PBS 缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别
●固定液4%多聚甲醛（溶于PBS 缓冲液）
●丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS 缓冲液）
●Fluoromount-GTM 水溶性封片剂（不含DAPI） ，DAPI
●DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片剂（含DAPI）
●BSA，标准级别
●载玻片和盖玻片
●盖玻片周围密封液（如透明指甲油）
●组装有Fluor 594激发/发射滤片，以及DAPI 激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。
保存条件：
-20℃ 避光干燥,1年有效。
注意事项：
1：荧光标记鬼笔环肽的一个单位 (T) 的定义：按照推荐工作液浓度200 nM ，每次用量为 100 μL 染色工作液时，可以检测的次数300次；按照工作液浓度100 nM ，每次用量为 200 μL 染色工作液时，可以检测的次数也是300次。
2：鬼笔环肽具有毒性，需小心操作。
3：本产品为冻干粉形式，微量不易观察 使用前瞬时离心，加溶剂溶解后使用，溶解后接近无色。
4：产品仅限于专业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
2：鬼笔环肽具有毒性，需小心操作。
3：本产品为冻干粉形式，微量不易观察 使用前瞬时离心，加溶剂溶解后使用，溶解后接近无色。
4：产品仅限于专业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
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搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
