中文名称: 核酸染料red 买十赠三
英文名称:
CAS No:
PS1223 核酸染料red 10000× in H2O (psaitong)
包装规格:
500uL in glass bottle
产品简介:
一种具有凝胶染色特性,并可替换高毒性染色剂溴化乙锭(EB)的红色荧光核酸染色剂。Gelred与EB有着相同的光谱特性,可以在不改变任何成像系统的情况下用来替换EB。本产品为10000X in H2O为浓缩的 GelRed 溶液。使用时,可稀释10,000倍后使用。
操作步骤:
一:胶染法(预染法,⽤法EB完全相同)
制胶时加⼊染料Red(染料灵敏,每100mL琼脂糖溶液中加⼊10μL 原装液即可)。 按常规⽅法电泳。
1:实验室材料和试剂
a:实验样品:质粒DNA,DNA marker(国产的DNA marker 浓度太⾼,⾄少稀释 2-3 倍后使⽤)。
b:TBE 缓冲:10X TBE 电泳缓冲液⽤ ddH2O 稀释 10 倍配制 1X TBE 电泳缓冲液。
c:TAE 缓冲液:稀释50倍配制1X TAE电泳缓冲液。
d:溴酚蓝指示剂,1%的琼脂糖凝胶,电泳仪(130v),移液器(0.5-10ul),凝胶成像仪
2:实验步骤
a:制胶:将 0.5g 琼脂糖溶于 50mL 1X TBE 电泳缓冲液中,加热⾄琼脂糖完全融化。将融好的琼脂糖溶液室温放置 50℃左右加⼊ 5uL 的染料Red凝胶电泳染料,摇匀。
b:倒胶:将制好的琼脂糖凝胶缓慢倒于制胶托盘内,避免产⽣⽓泡。将点样梳⼦垂直置于电泳胶膜的⼀端,距离托盘底部约1mm。放置时尽量保持平稳,切勿晃动。
c:置胶:待约 30 分钟左右胶体充分凝固后,缓慢垂直向上拔起点样梳⼦,切勿用力过猛。(夏季适当延长凝胶时间)
d:将琼脂糖凝胶放⼊电泳槽内,加⼊电泳缓冲液,使电泳缓冲液液⾯⾼于凝胶⾯约 1-2mm。
e:将混合溴酚蓝指示剂的 DNA 样本(1ul 溴酚蓝与 2ul DNA 标本混合)加⼊到点样孔内。
f:盖上电泳槽盖,开启电源,使 DNA 从负极移向正极恒压电泳(电压恒定在 120-130v 之间,⼀般可选择 130V)。
g:DNA条带距离点样孔约1-2cm 后关闭电源,(约 30-40 分钟)取出凝胶。
h:用302nm 激发的UV凝胶成像系统观察结果。
*此方法染色染料用量相对较少。染料加入胶中可直接使用微波炉加热,制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完。
*此胶染法(预染法)不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法(后染法)。
二:泡染法(后染法)
1:按照以上常规⽅法进⾏电泳。 用于胶回收等高浓度DNA样品强烈推荐泡染法!
2:将染料Red 10,000×储液稀释约10000倍到0.1M NaCl溶液中制成1×染色液。(例如将5μL 染料Red10,000×原装液加入到50mL 0.1M NaCl溶液中)。
3:将凝胶小心地放⼊合适的容器中(如聚丙烯容器中)缓慢加入足量的1×染⾊液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,最佳染⾊时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同略有不同。对于含1%的凝胶,染色时间约30min。
4:用302nm激发的紫外凝胶成像系统观察结果。
*泡染出现的条带弯曲和拖带的现象与样品的质量和凝胶的浓度有关,并不是染料的问题!泡染比预染适当提高琼脂糖凝胶浓度约0.2%-0.3%。
*用泡染法染色时,染料用量较多。1×染料染色液室温避光保存,可重复使用3次左右。
三:核酸电泳的PAGE步骤
1:将TBE制备的凝胶放⼊电泳槽中,⽤夹⼦夹住边缘。
2:⽤配置凝胶溶液同⼀批次的5×TBE灌满缓冲液槽。⽤注射器排除凝胶底部的⽓泡。
3:⽤注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶上样缓冲液混合,⽤微量移液管加⼊加样孔。
4:将电极与电源相连(正极接下槽),打开电源⼀般90V;1-8V/cm。进⾏电泳9h。
5:电泳⾄标准参照染料迁移⾄所需位置(⼀般是电泳到⼆甲苯完全迁出,溴酚蓝距底边2-3cm停⽌)。关闭电源,拔掉插头,弃去电泳槽中的电泳液
6:将凝胶取下来放⼊,染⾊⽫中,加3X 染料Red的1X缓冲液中的振荡染⾊30-60分,放置在紫外检测即可。
*注意事项:PAGE不能用预染或点染的方法;只能用泡染的方法显色,由于聚丙烯酰胺比较致密,染料不容易深入,显色效果没有琼酯糖凝胶好。
产品特点:
1:带形清晰整齐。
2:相对安全:独特油性⼤分⼦使其不能穿透细胞膜进⼊细胞,实验显示在凝胶染色浓度下无致突变性,可以代替致癌物溴化乙锭EB作为各种核酸电泳的染⾊剂。
3:迁移率好:EB小分子很快跑出胶外,所以EB容易导致⼩DNA⽚段看不清,本产品可以克服这⼀点。
4:定量准确:适⽤于核酸分⼦⼤⼩的确定和定量,EB对⼩DNA⽚段定量不准确。
5:染色均匀:整个凝胶负极端和正极端的亮度⼀样。EB会导致胶的整体背景稍微高些,经常出现阴 阳背景(胶的背景⼀部分亮⼀部分暗);EB长时间、长距离的电泳,EB信号强度会相应下降。本产品可以克服这⼀点。
6:灵敏度⾼:适⽤于各种大小片段的电泳染⾊,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
7:稳定性⾼:耐热,可加在缓冲液⾥,100℃溶解凝胶,防止染⾊剂没充分混匀。适用于微波或其它加热⽅法制备琼脂糖凝胶。
8:耐光性强:实验室的⽇常光线照射环境下可以常温放置24个月。
9:信噪比好:样品荧光信号强,背景信号低,荧光亮度是EB的十倍以上,⾁眼可观测到亮度明显比EB强。
10:操作简单:与EB⽤法完全⼀样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;⽽电泳后染⾊过程也只需30分钟且无需脱⾊或冲洗。
11:适用范围⼴:适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于dsDNA、ssDNA或RNA染⾊。
12:完美兼容:SafeRed兼容所有的紫外凝胶透射仪;SafeGreen兼容所有的蓝光仪和可见光仪器。本产品与EB有相近的光谱特性,⽆需改变滤光⽚及观察装置:标准的EB滤光⽚或SYBR滤光⽚都适用,使用和EB相同紫外凝胶透射仪,在300nm紫外光附近可得到最佳激发。
注意事项:
1:鉴于本产品的高灵敏性,建议减少DNA的上样量。DNA 样品最佳上样量为~100ng/泳道(常规8泳道⼩胶孔)。
2:部分国产的DNA marker浓度太⾼,稀释⼀倍后使用!⽬前国产的部分marker是基于EB染料开发的酶切的混合⽚段,请使⽤后染法。
3:更换电泳缓冲液,新配置的电泳液效果好!用TBE 缓冲液代替TAE效果更好!
4:电泳时电压不宜过高,⼀般不要超过130V。与EB相⽐,本产品电泳电压要低⼀些,跑胶的时间长⼀些。
5:染料在室温或4℃下避光储存即可;若有沉淀,将染料加热⾄40-50℃并充分振荡溶解,不影响使用。
6:由于本产品具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加后充分振荡混匀。也可以加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉加热以制备琼脂糖凝胶。
7:如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使⽤电泳后泡染法染胶。
8:如果用的是紫外成像仪,请选择染料Red;如果使⽤激光成像仪或在可见光下观测,请选择染料Green。
保存条件:
2-8°C 两年
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安全说明:
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参考文献 & 客户发表文献

本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)

摩尔浓度计算公式

  • =
    *
    *
    *选择对应的单位 *空出希望得到的变量,填写另外两个变量

用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积

稀释公式

稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )

  • * = *

连续稀释计算器方程

  • 连续稀释

  • 初始浓度:
  • 稀释倍数:
  • 计算结果

  • C1=C0/X C1: LOG(C1):
    C2=C1/X C2: LOG(C2):
    C3=C2/X C3: LOG(C3):
    C4=C3/X C4: LOG(C4):
    C5=C4/X C5: LOG(C5):
    C6=C5/X C6: LOG(C6):
    C7=C6/X C7: LOG(C7):
    C8=C7/X C8: LOG(C8):