产品简介:
本产品可以通过简单操作,快速去除植物组织中的淀粉、多糖等成分,释放RNA。适用于植物种子总RNA提取,比如小麦种子、小麦籽粒、水稻种子、芝麻种子、玉米干种子、玉米新鲜种子、豌豆种子、红豆种子、绿豆种子、向日葵种子、西瓜种子等。使用该试剂盒可以从难于提取的植物样本中快速获得高纯度、高完整性的总RNA,可以同时处理大量样品,没有蛋白和基因组DNA的污染。该试剂盒可以从具有再生能力的块状根茎组织中提取高品质的总RNA,比如草菇根部的菌丝、马铃薯的根、芍药根等组织。
操作步骤:
1:将样品转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状。
2:每1mlS1可处理20-50mg组织(小麦、水稻、玉米等常见物种,其他物种可以适当增加组织),将打磨好的样品加入到适量的S1(请确认已加入β-巯基乙醇)中,立即手腕用力上下颠倒至分散均匀,无块状物,13,000g4℃离心10min,小心吸取600ul上清液至新的EP管中。
注意:若样品总RNA含量比较低,或者期望获得更多的总RNA时,最多可以吸取更多上清液,平分至两管,并按比例增加后续氯仿和异丙醇用量。
3:加入600ulS2,颠倒混匀,加入200ul氯仿,用力振荡15s,室温孵育5min。
4:13,000g4℃离心10min,小心吸取上清(约500ul)至新的1.5EP管中。
5:向上述上清液中加入300ul的异丙醇,手腕轻轻的上下颠倒混匀,并全部转移到吸附柱中,13,000g4℃离心1min。
6:弃废液,内套管中加入600ulWB(使用前确保已加入无水乙醇),13,000rpm4℃离心1min。
7:重复步骤6。
8:弃废液,13,000g4℃空柱离心2min。
9:将内套管移入新的EP管中,室温静置2-5min,使残留乙醇挥发,在膜中央加入EB(洗脱液)30-200μl,室温静置2min,13,000rpm4℃离心1min,获得总RNA。
若要获得更多的总RNA,可以将洗脱下来的RNA溶液再重新加到吸附柱的膜中央,室温静置2min,13,000rpm4℃离心1min,获得总RNA。
2:每1mlS1可处理20-50mg组织(小麦、水稻、玉米等常见物种,其他物种可以适当增加组织),将打磨好的样品加入到适量的S1(请确认已加入β-巯基乙醇)中,立即手腕用力上下颠倒至分散均匀,无块状物,13,000g4℃离心10min,小心吸取600ul上清液至新的EP管中。
注意:若样品总RNA含量比较低,或者期望获得更多的总RNA时,最多可以吸取更多上清液,平分至两管,并按比例增加后续氯仿和异丙醇用量。
3:加入600ulS2,颠倒混匀,加入200ul氯仿,用力振荡15s,室温孵育5min。
4:13,000g4℃离心10min,小心吸取上清(约500ul)至新的1.5EP管中。
5:向上述上清液中加入300ul的异丙醇,手腕轻轻的上下颠倒混匀,并全部转移到吸附柱中,13,000g4℃离心1min。
6:弃废液,内套管中加入600ulWB(使用前确保已加入无水乙醇),13,000rpm4℃离心1min。
7:重复步骤6。
8:弃废液,13,000g4℃空柱离心2min。
9:将内套管移入新的EP管中,室温静置2-5min,使残留乙醇挥发,在膜中央加入EB(洗脱液)30-200μl,室温静置2min,13,000rpm4℃离心1min,获得总RNA。
若要获得更多的总RNA,可以将洗脱下来的RNA溶液再重新加到吸附柱的膜中央,室温静置2min,13,000rpm4℃离心1min,获得总RNA。
自备材料:
氯仿、异丙醇、无水乙醇、β -巯基乙醇。
组分:
组分名称 | 20T | 50T | 储存 |
S1 | 20mL | 50mL | RT |
S2 | 20mL | 50mL | 2-8℃ |
WB(漂洗液) | 7.5mL | 15mL | RT |
EB(洗脱液) | 10mL | 10mL | RT |
吸附柱和套管 | 20EA | 50EA | RT |
注意事项:
1:首次使用WB(WashingBuffer漂洗液)时,请按照瓶身标注(1:3的比例)加入无水乙醇,混匀并做好标记。
2:每次提取时在S1(SolutionI)溶液中,加入1%的β-巯基乙醇,即每1mlS1加入10ulβ-巯基乙醇。加过β-巯基乙醇的S1溶液请置于4℃冰箱保存,并在当天用完。β-巯基乙醇每次现用现加效果最好。
3:S2(SolutionII)含有强变性剂,请勿直接于皮肤接触或吞咽,若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服,戴手套。
2:每次提取时在S1(SolutionI)溶液中,加入1%的β-巯基乙醇,即每1mlS1加入10ulβ-巯基乙醇。加过β-巯基乙醇的S1溶液请置于4℃冰箱保存,并在当天用完。β-巯基乙醇每次现用现加效果最好。
3:S2(SolutionII)含有强变性剂,请勿直接于皮肤接触或吞咽,若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服,戴手套。
保存条件:
室温运输,按说明书保存。
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )