中文名称: 植物RNA通用快速提取试剂盒
英文名称:
CAS No:
PS1391 植物RNA通用快速提取试剂盒 带 DNA 酶柱上消化 (psaitong)
产品简介:
本产品独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,DNase直接在柱上消化残留DNA,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free H2O 将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
操作步骤:
一:直接研磨法
1:新鲜植物组织称重后取100-200mg迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100-200mg放入研钵),加入1ml裂解液RPA室温下充分研磨成匀浆,注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
2:将裂解物转入离心管,剧烈摇晃振荡15秒,13,000rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片。
3:取480μl裂解物上清(在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。
4:立刻接操作步骤的步骤三。
二:液氮研磨法(液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理,可以提高产量。也就是使用1ml的裂解液RPA和100-200mg的样品。)
1:取500μl裂解液RPA,转入1.5ml离心管中。
2:液氮中研磨适量植物组织成细粉后,取50-100mg细粉转入上述装有RPA的离心管,立即用手剧烈振荡20秒,充分裂解。
3:用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。
4:将裂解物13,000rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片。
5:取裂解物上清(在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多的上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。
6:立刻接操作步骤的步骤三。
三:将混合物(每次小于720μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心2分钟,弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间。
四:加350μl去蛋白液RW1,室温放置1分钟,13,000rpm离心30秒,弃掉废液。
五:DNaseI工作液配制:取45μlDNaseIbuffer和5μlRNasefreeDNaseI在离心管轻轻吹打混匀成工作液(处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液)。
六:向吸附柱RA中央加入50μl的DNaseI工作液,室温(20-30℃)放置15分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上,不要让工作液滴在O型圈或是离心柱管壁上。
七:向吸附柱RA中加入350μl去蛋白液RW1,12,000rpm离心30秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
八:加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),13,000rpm离心30秒,弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。
九:将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
十:取出吸附柱RA,放入一个RNasefree离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μlRNasefreewater(事先在70-90℃水浴中加热可提高产量),室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟。
十一:如果预期RNA产量>30μg,加30-50μlRNasefreewater重复步骤10,合并两次洗液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。
洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。
如果不需要做荧光定量PCR,仅仅做普通的反转录,克隆基因片段,可以省略DNA酶柱上消化的步骤,具体就是第四步骤的“加350μl 去蛋白液 RW1”改成“加 700μl 去蛋白液 RW1”,同时省略步骤五六七。
产品特点:
1:完全不使用β-巯基乙醇/苯酚/氯仿,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2:简捷,单个样品操作一般可在 40 分钟内完成。
3:配套 DNase I 柱上消化,得到的RNA不残留DNase消化,可直接用于反转录荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。
4:可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。
5:多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达2.0-2.2,无DNA残留,可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。
组分:
组分名称 50T 储存
裂解液 RPA 50mL RT
去蛋白液 RW1 40mL RT
漂洗液 RW(第一次使用前按说明加指定量乙醇) 10mL RT
RNase-free H2O 10mL RT
DNase Buffer 1.25 mLx2 -20℃
RNase free DNase I 0.25mL -20℃
RNase-free吸附柱 RA 和收集管 50EA RT
DNase Buffer 含 Mn2+,可能有轻度发黄发黑,甚至黑色沉淀为正常现象,颠倒混匀后正常使用即可。
注意事项:
1:所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。
2:需要自备乙醇,研钵(可选)。
3:裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
保存条件:
低温运输,按说明书保存。
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献

本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)

摩尔浓度计算公式

  • =
    *
    *
    *选择对应的单位 *空出希望得到的变量,填写另外两个变量

用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积

稀释公式

稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )

  • * = *

连续稀释计算器方程

  • 连续稀释

  • 初始浓度:
  • 稀释倍数:
  • 计算结果

  • C1=C0/X C1: LOG(C1):
    C2=C1/X C2: LOG(C2):
    C3=C2/X C3: LOG(C3):
    C4=C3/X C4: LOG(C4):
    C5=C4/X C5: LOG(C5):
    C6=C5/X C6: LOG(C6):
    C7=C6/X C7: LOG(C7):
    C8=C7/X C8: LOG(C8):