产品简介：
本产品适用于从福尔马林固定、石蜡包埋组织中有效纯化基因组DNA。本品使用专门优化脱蜡剂和裂解液，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，不涉及有机试剂二甲苯，无需过夜操作;消化后的样品在较高的温度孵育后，去除游离DNA的福尔马林交联，有效提高DNA的产量和纯度;优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到吸附膜上，抑制剂通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。同时配置高效微量吸附柱，洗脱体积可低至20μl。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-timePCR、SNP基因分型、STR基因分型、二代测序和药物基因组学研究等。从福尔马林固定、石蜡包埋样本中分离的DNA分子量通常低于新鲜或冷冻样本中的DNA。DNA片段化的程度取决于样本类型、储存时间以及固定的条件。
操作步骤：
一：石蜡包埋样本
1：用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5-10μm的薄片。
2：取约1×1cm2的切片(共约3-8片切片)置于离心管(自备)中，加入160μlBufferDS，涡旋震荡10秒。短暂离心将样本收集到管底。56°C孵育3分钟，水浴锅中取出后静置，降至室温后进行下一步操作。
注意:如果样品表面暴露在空气中，最初的2-3片弃掉不用。
3：上述管中加入180μlBufferGTL，涡旋震荡混匀，12,000rpm离心1分钟，溶液分为两层。取20μlProteinaseK加入到下层溶液中，移液器小心吹吸混匀。
4：56̊C孵育1小时，直至样品完全溶解。90̊C孵育1小时。12,000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取下层的水相于新的离心管中。
注意:此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
56̊C孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90̊C后再把样品置于90̊C孵育。如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100mg/ml的RNaseA溶液。
二：福尔马林等固定液中的样本
1：取约 20 mg 的样本，切成小块，置于离心管中，加入 500 μl 10mM PBS(PH7.4)，涡旋振荡，12,000 rpm(~13,400×g)离心1 分钟，弃上清，重复3次。
2：上述管中加入 180 μl Buffer GTL，20 μl Proteinase K，涡旋震荡混匀。
3：56̊C 孵育 1 小时，直至样品完全溶解。90̊C 孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意:此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成 DNA 断裂，产生 DNA 碎片。
56̊C 孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90̊C 后再把样品置于90̊C 孵育。
4：12,000 rpm 离心 1 分钟，使用 200 μl 枪头沿管壁小心吸取上清到新的离心管中。
注意:如需除去 RNA，可将样品温度降到室温后，加入 2 μl 浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 溶液。
以下为两种不同来源样本提取的共同步骤:
5：加入 200 μl Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入 200 μl 无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意:加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即充分混匀。
加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
如果需要对多个样品进行操作，可以将 Buffer GL 和无水乙醇事先混匀后加样。
6：将步骤 5 所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DF)中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7：向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8：向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高 DNA 纯度，可重复步骤8。
9：12,000 rpm 离心 2 分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应。
10：将吸附柱置于一个新的1.5 ml收集管中，向吸附柱的中间部位悬空加入 20-100 μl Buffer EB 或灭菌水，室温放置 2-5 分钟，12,000rpm离心1分钟，收集DNA 溶液，-20 ̊C 保存 DNA。
注意:洗脱液的 pH 值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5，pH 值低于 7.0 时洗脱效率不高。
如果要提高 DNA 的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2分钟，12,000 rpm离心1分钟。
1：用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5-10μm的薄片。
2：取约1×1cm2的切片(共约3-8片切片)置于离心管(自备)中，加入160μlBufferDS，涡旋震荡10秒。短暂离心将样本收集到管底。56°C孵育3分钟，水浴锅中取出后静置，降至室温后进行下一步操作。
注意:如果样品表面暴露在空气中，最初的2-3片弃掉不用。
3：上述管中加入180μlBufferGTL，涡旋震荡混匀，12,000rpm离心1分钟，溶液分为两层。取20μlProteinaseK加入到下层溶液中，移液器小心吹吸混匀。
4：56̊C孵育1小时，直至样品完全溶解。90̊C孵育1小时。12,000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取下层的水相于新的离心管中。
注意:此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
56̊C孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90̊C后再把样品置于90̊C孵育。如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100mg/ml的RNaseA溶液。
二：福尔马林等固定液中的样本
1：取约 20 mg 的样本，切成小块，置于离心管中，加入 500 μl 10mM PBS(PH7.4)，涡旋振荡，12,000 rpm(~13,400×g)离心1 分钟，弃上清，重复3次。
2：上述管中加入 180 μl Buffer GTL，20 μl Proteinase K，涡旋震荡混匀。
3：56̊C 孵育 1 小时，直至样品完全溶解。90̊C 孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意:此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成 DNA 断裂，产生 DNA 碎片。
56̊C 孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90̊C 后再把样品置于90̊C 孵育。
4：12,000 rpm 离心 1 分钟，使用 200 μl 枪头沿管壁小心吸取上清到新的离心管中。
注意:如需除去 RNA，可将样品温度降到室温后，加入 2 μl 浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 溶液。
以下为两种不同来源样本提取的共同步骤:
5：加入 200 μl Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入 200 μl 无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意:加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即充分混匀。
加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
如果需要对多个样品进行操作，可以将 Buffer GL 和无水乙醇事先混匀后加样。
6：将步骤 5 所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DF)中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7：向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8：向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高 DNA 纯度，可重复步骤8。
9：12,000 rpm 离心 2 分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应。
10：将吸附柱置于一个新的1.5 ml收集管中，向吸附柱的中间部位悬空加入 20-100 μl Buffer EB 或灭菌水，室温放置 2-5 分钟，12,000rpm离心1分钟，收集DNA 溶液，-20 ̊C 保存 DNA。
注意:洗脱液的 pH 值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5，pH 值低于 7.0 时洗脱效率不高。
如果要提高 DNA 的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2分钟，12,000 rpm离心1分钟。
组分：
| 组分名称 | 50T | 储存 |
| BufferGTL | 15mL | RT |
| BufferGL | 15mL | RT |
| BufferGW1(concentrate) | 13mL | RT |
| BufferGW2(concentrate) | 15mL | RT |
| BufferEB | 10mL | RT |
| BufferDS | 10mL | RT |
| ProteinaseK | 25mg | -20℃ |
| ProteinaseKStorageBuffer | 1.25mL | -20℃ |
| SpinColumnsDFWithCollectionTubes | 50个 | RT |
| CentrifugeTubes(L-1.5ml) | 50个 | RT |
注意事项：
1：获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久(>1年)则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。
2：确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制ProteinaseK的作用。
3：向ProteinaseK中加入1.25mlProteinaseKStorageBuffer使其溶解，-20̊C保存。配制好的ProteinaseK勿长时间室温放置，以免影响其活性。
4：第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在BufferGW1和BufferGW2中加入无水乙醇。
5：使用前请检查BufferGTL、BufferGL和BufferDS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将BufferGTL、BufferGL和BufferDS于56̊C水浴重新溶解。
6：如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入BufferGL前加入2μlDNase-Free的RNaseA(100mg/ml)。
7：实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56̊C。
2：确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制ProteinaseK的作用。
3：向ProteinaseK中加入1.25mlProteinaseKStorageBuffer使其溶解，-20̊C保存。配制好的ProteinaseK勿长时间室温放置，以免影响其活性。
4：第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在BufferGW1和BufferGW2中加入无水乙醇。
5：使用前请检查BufferGTL、BufferGL和BufferDS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将BufferGTL、BufferGL和BufferDS于56̊C水浴重新溶解。
6：如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入BufferGL前加入2μlDNase-Free的RNaseA(100mg/ml)。
7：实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56̊C。
保存条件：
室温 12个月
自备试剂：
无水乙醇(E20003)
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
