中文名称: 血液基因组DNA小量提取试剂盒(0.1-1ml)
英文名称: Blood Genomic DNA Kit (0.1-1ml)
CAS No:
PS1369 血液基因组DNA小量提取试剂盒(0.1-1ml) 非柱式 (psaitong)
产品简介:
本产品提供了一种快速、灵活的方法,适用于新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的样品)提取总DNA,包括基因组DNA和线粒体DNA。本品可以灵活处理0.1-20 ml的全血,采用非离心柱的方法,无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂,有效去除蛋白、色素、脂类及其它抑制性杂质污染。整个过程在一个管中操作,减少了污染及样本混淆的风险。提取的DNA产量高、质量好,可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot以及文库构建等实验。
操作步骤:
一:从 100-900μl 全血中提取基因组 DNA(以300μl血液处理量为例)
1:取 300μl 全血于 2ml 离心管中,加入 600μl(2×样本体积)1×Buffer RCL,上下颠倒混匀,室温放置 3 min,10,000xg 离心 30 秒,弃上清。
2:如果红色较重,再重复步骤1一次。
注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上,可以减少管壁上清的回流。
3:按照附表配制Buffer GL与Proteinase K 的混合液(比例100:1)。
注意:此混合液最好现用现配,并在配好后1小时之内用完。
4:加入150µl Buffer GL与Proteinase K的混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意:如果有多个样品同时操作,加入BufferGL/Proteinase K混合液立即涡旋振荡,不要等所有样品都加完了再振荡。
通常涡旋振荡3-5次,每次5秒,可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋振荡后发现沉淀中含胶状物质,可以再加入30µl BufferGL/Proteinase K 混合液,再次涡旋混匀。
5:65℃ 孵育 10 分钟,期间颠倒混匀数次。
注意:如果样品颜色从红色变成橄榄绿,说明蛋白消化完全。
6:加入 150μl 异丙醇,上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或者簇状基因组 DNA。
注意:与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要,如果样品中白细胞含量少,可能看不到 DNA,则至少上下颠倒离心管 20 次确保沉淀完全。
7:10,000xg 离心 5 分钟。如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或者增大离心力。
8:弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。少数时候沉淀可能贴壁不牢,不要吸弃沉淀。
9:加入 300μl 70%乙醇,涡旋振荡5秒,10,000xg 离心 5 分钟,弃上清。如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或者增大离心 力。
10:把离心管倒置于干净的吸水纸上 5 分钟,确保沉淀在管中。在管底可见白色的 DNA 沉淀,在极少数情况下沉淀可能会松弛,所 以尽量缓慢倒掉上清。
11:空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少 5 分钟)。乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切或者 PCR 等)实验,但避 免过度干燥 DNA,因为过度干燥会使 DNA 难于溶解。
12:加入100 - 200μl Buffer GE, 低速涡旋 5 秒,65℃ 孵育1小时溶解DNA,期间轻弹数次助溶,-20℃ 保存DNA。如果DNA没有完全溶解,可室温过夜。
二:从 1-5ml 全血中提取基因组 DNA(以 3ml 血液处理量为例)
1:取 3ml 全血于 15ml 离心管中,加入 6ml(2×样本体积)1×Buffer RCL,上下颠倒混匀,室温放置 3 min,10,000xg 离心 30 秒,弃上清。
2:如果红色较重,再重复步骤 1 一次。
注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上,可以减少管壁上清的回流。
3:按照附表配制BufferGL与Proteinase K的混合液(比例 100:1)。
注意:此混合液最好现用现配,并在配好后 1 小时之内用完。
4:加入 1.5 ml BufferGL 与 Proteinase K 的混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意:如果有多个样品同时操作,加入 BufferGL/Proteinase K 混合液立即涡旋振荡,不要等所有样品都加完了再振荡。
通常涡旋振荡 3-5 次,每次 5 秒,可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋振荡后发现沉淀中含胶状物质,可以再加入 300μl BufferGL/Proteinase K 混合液,再次涡旋混匀。
5:65℃ 孵育 10-30 分钟,期间颠倒混匀数次。
注意:如果样品颜色从红色变成橄榄绿,说明蛋白消化完全。
6:加入1.5ml异丙醇,上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或者簇状基因组 DNA。
注意:与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要,如果样品中白细胞含量少,可能看不到 DNA,则至少上下颠倒离心管 20 次确 保沉淀完全。
7:2,500xg 离心 5 分钟。如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或者增大离心力。
8:弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。少数时候沉淀可能贴壁不牢,不要吸弃沉淀。
9:加入 1.5ml 70%乙醇,涡旋振荡 5 秒,2,500xg 离心 5 分钟,弃上清。如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或者增大离心力。
10:把离心管倒置于干净的吸水纸上 5 分钟,确保沉淀在管中。在管底可见白色的 DNA 沉淀,在极少数情况下沉淀可能会松弛,所 以尽量缓慢倒掉上清。
11:空气干燥 DNA 沉淀直至所有的液体挥发干净(至少 5 分钟)。乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切或者 PCR 等)实验,但避 免过度干燥 DNA,因为过度干燥会使DNA难于溶解。
12:加入 300μl Buffer GE, 低速涡旋 5 秒,65℃ 孵育 1 小时溶解 DNA,期间轻弹数次助溶,-20℃ 保存 DNA。如果 DNA 没有完 全溶解,可室温过夜。
三:从 6-20ml 全血中提取基因组 DNA(以 10ml 血液处理量为例)
1:取 10ml 全血于 50ml 离心管中,加入 20ml(2×样本体积)1×Buffer RCL,上下颠倒混匀,室温放置 3 min,10,000xg 离心 30 秒,弃上清。
2:如果红色较重,再重复步骤 1 一次。
注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上,可以减少管壁上清的回流。
3:按照附表配制 BufferGL 与 Proteinase K 的混合液(比例 100:1)。
注意:此混合液最好现用现配,并在配好后 1 小时之内用完。
4:加入 5 ml Buffer GL 与 Proteinase K 的混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
如果有多个样品同时操作,加入 BufferGL/Proteinase K 混合液立即涡旋振荡,不要等所有样品都加完了再振荡。
通常涡旋振荡 3-5 次,每次 5 秒,可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋振荡后发现沉淀中含胶状物质,可以再加入 1ml BufferGL/Proteinase K 混合液,再次涡旋混匀。
5:65℃ 孵育 10-30 分钟,期间颠倒混匀数次。
注意:如果样品颜色从红色变成橄榄绿,说明蛋白消化完全。
6:加入 5ml 异丙醇,上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或者簇状基因组 DNA。
注意:与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要,如果样品中白细胞含量少,可能看不到 DNA,则至少上下颠倒离心管 20 次确保沉淀完全。
7:2,500xg 离心 5 分钟。如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或者增大离心力。
8:弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。少数时候沉淀可能贴壁不牢,不要吸弃沉淀。
9:加入 5ml 70%乙醇,涡旋振荡 5 秒,2,500xg 离心 5 分钟,弃上清。如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或者增大离心力。
10:把离心管倒置于干净的吸水纸上 5 分钟,确保沉淀在管中。在管底可见白色的 DNA 沉淀,在极少数情况下沉淀可能会松弛,所 以尽量缓慢倒掉上清。
11:空气干燥 DNA 沉淀直至所有的液体挥发干净(至少 5 分钟)。乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切或者 PCR 等)实验,但避 免过度干燥 DNA,因为过度干燥会使 DNA 难于溶解。
12:加入 1ml Buffer GE, 低速涡旋5秒,65℃ 孵育1小时溶解 DNA,期间轻弹数次助溶,-20℃ 保存 DNA。如果DNA没有完全溶解,可室温过夜。

附不同体积血液所需各种缓冲液用量
血液体积的体积(μl): 100 300 1000 3000 5000 10000 20000
1×Buffer RCL (μl) 400 1200 4000 12000 20000 40000 80000
Buffer GL (μl) 50 150 500 1500 2500 5000 10000
Proteinase K (μl) 0.5 1.5 5 15 25 50 100
异丙醇 (μl) 50 150 500 1500 2500 5000 10000
70%乙醇 (μl) 50 150 500 1500 2500 5000 10000
Buffer GE (μl) 100 200 200 300 500 1000 1000
补加 Buffer GL 和 Proteinase K 混合液 10 30 100 300 500 1000 1000
产品特点:
1:纯度高:提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
2:提取量大:可从0.1-20 ml的全血中提取DNA,无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂。
3:兼容性强:适用于处理各种血液和细胞样本。
组分:
组分名称 50T 200T 储存
10×Buffer RCL 25mL 100mL 2-8˚C
Buffer GL 30mL 120mL RT
Buffer GE 15mL 60 mL RT
Proteinase K 250ul 1mL RT
注意事项:
1:根据需要取相应量的 10×Buffer RCL 稀释成 1×工作液,1ml 血液需要 0.4ml 10×Buffer RCL。
2:所有离心操作均在室温下完成。
3:血液样品反复冻融,会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降,所得的基因组 DNA 也应尽可能避免反复冻融,以免降解。如果 提取冷冻血液的基因组 DNA,建议 37℃ 水浴,迅速解冻后再进行后续操作。
血液样品的储存:
短期保存:已加入抗凝剂的血液样品可在 2-8℃ 储存最多 10 天,对于某些实验例如 Southern 杂交等,需要得到完整全长的 基因组 DNA,请将血液样品在 2-8℃ 储存不超过 3 天,此时基因组 DNA 的降解程度较轻。
长期保存:已加入抗凝剂的血液请置于-70℃ 保存(如果提取的是高分子量的 DNA,推荐使用 EDTA 作为抗凝剂)。
保存条件:
室温 12个月
自备试剂:
无水乙醇
异丙醇(I20020)
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献

本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)

摩尔浓度计算公式

  • =
    *
    *
    *选择对应的单位 *空出希望得到的变量,填写另外两个变量

用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积

稀释公式

稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )

  • * = *

连续稀释计算器方程

  • 连续稀释

  • 初始浓度:
  • 稀释倍数:
  • 计算结果

  • C1=C0/X C1: LOG(C1):
    C2=C1/X C2: LOG(C2):
    C3=C2/X C3: LOG(C3):
    C4=C3/X C4: LOG(C4):
    C5=C4/X C5: LOG(C5):
    C6=C5/X C6: LOG(C6):
    C7=C6/X C7: LOG(C7):
    C8=C7/X C8: LOG(C8):