产品简介:
本产品适用于从新鲜或冷冻的干燥土壤、湿泥、淤泥及海河沉淀物中提取总DNA。本产品使用安全方便,单个样品操作一般可在40 分钟内完成。使用本品每克土壤可获得5μg以上的DNA,片段长度主要在20-30 kb之间。本试剂盒采用独特的溶液能够有效去除杂质 和腐殖酸,通过优化的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上,土壤中残留的杂质、PCR和酶反应的抑制剂可通过两步洗涤 步骤有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、 文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
操作步骤:
1:取0.1 g-0.3 g土壤样本,置于离心管(自备)中,加入1 ml Buffer SW,涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来)。12,000 rpm (~13,400×g)离心1分钟,倒掉上清。
2:加入750 μl 70%乙醇,涡旋振荡1分钟(须将管底的土壤震起来),12,000 rpm离心1分钟,倒掉上清,用移液器将余液吸尽。
3:向沉淀中加入500 μl Buffer SL,涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来),65℃水浴20分钟(可每隔5分钟涡旋振荡5秒),12,000 rpm离心3分钟,将上清移至新的离心管(自备)中。
4:向上清液中加等体积Buffer GLS,颠倒混匀15-25次,冰上放置5分钟。12,000 rpm离心5分钟。
第4步请注意:冰上放置后液体可能会凝结,属正常现象。
5:将步骤4中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
第5步请注意:若一次不能加完溶液,可分多次转入。
6: 向吸附柱中加入500μl Buffer PR(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 重新放回收集管中。
7:向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附 柱重新放回收集管中。
8:向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附 柱重新放回收集管中。
第8步:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8。
9:12,000 rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
第9步:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10:将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12,000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
2:加入750 μl 70%乙醇,涡旋振荡1分钟(须将管底的土壤震起来),12,000 rpm离心1分钟,倒掉上清,用移液器将余液吸尽。
3:向沉淀中加入500 μl Buffer SL,涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来),65℃水浴20分钟(可每隔5分钟涡旋振荡5秒),12,000 rpm离心3分钟,将上清移至新的离心管(自备)中。
4:向上清液中加等体积Buffer GLS,颠倒混匀15-25次,冰上放置5分钟。12,000 rpm离心5分钟。
第4步请注意:冰上放置后液体可能会凝结,属正常现象。
5:将步骤4中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
第5步请注意:若一次不能加完溶液,可分多次转入。
6: 向吸附柱中加入500μl Buffer PR(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 重新放回收集管中。
7:向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附 柱重新放回收集管中。
8:向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附 柱重新放回收集管中。
第8步:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8。
9:12,000 rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
第9步:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10:将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12,000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
组分:
组分名称 | 50T |
Buffer SW | 60 |
Buffer SL | 30mL |
Buffer GLS | 30mL |
Buffer PR (concentrate) | 13mL |
Buffer GW1 (concentrate) | 13mL |
Buffer GW2 (concentrate) | 15mL |
Buffer GE | 15mL |
Spin Columns DM with Colletion Tubes | 50个 |
注意事项:
1:如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2:离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3:用另外的50-100 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4:如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于100 μl, 可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5:因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20°C保存。
6:基因组DNA模板中微量的残余腐殖酸可能对PCR反应产生不良影响。此时将DNA稀释5-100倍问题通常即可解决。如经稀释后的DNA仍不能有效应用于PCR反应, 请使用腐殖酸清除剂,以获得更高效的清除效果。
2:离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3:用另外的50-100 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4:如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于100 μl, 可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5:因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20°C保存。
6:基因组DNA模板中微量的残余腐殖酸可能对PCR反应产生不良影响。此时将DNA稀释5-100倍问题通常即可解决。如经稀释后的DNA仍不能有效应用于PCR反应, 请使用腐殖酸清除剂,以获得更高效的清除效果。
保存条件:
室温 12个月
自备试剂:
无水乙醇(E20003)
70%乙醇
70%乙醇
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )