产品简介：
本产品采用 DNA 吸附柱和独有的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组 DNA。约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组 DNA。纯化DNA产物可直接用于 PCR、酶切和杂交等实验。酵母细胞经 lytic Enzyme 处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶 K 迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组 DNA 在高离序盐 状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
操作步骤：
平衡液的使用
1：介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理 后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若 不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至 37°C使沉淀完全消失。
2：使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。
操作步骤
第一次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次 加入。
吸取使用量的 Sorbitol buffer 加入 0.2%β-巯基乙醇，回复到室温备用。
1：取 1-3 毫升酵母培养物(不超过 3X107 cells，最好是早对数生长期)，12,000rpm 离心 30 秒，尽可能的吸弃上清，收集菌体。收集超过 1.5 毫升菌液，可以离心弃上清后，在同一个 1.5ml 管内加入更多的菌液，重复步骤 1，直到收集到足够的菌体。
2:加入 300μl Sorbitol buffer，轻柔吹打充分重悬细胞;再加入 50μl Lytic Enzyme 储液，充分颠倒混匀，37°C温育 1-3 小时消化细 胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。
第2步请注意：如果破壁效果不好导致产量低，可以加大 lytic Enzyme 用量来提高酶工作浓度，还可以延长消化时间或者提高温度到 45°C来 提高效果，不适合 Lytic Enzyme 消化的酵母可选用其它方法如 0.5mm 玻璃珠涡旋击打 ，反复冻融等。玻璃珠法:向菌体中 加入 180μl 缓冲液 YB 彻底悬浮菌体，加入 0.1g 直径为 0.45-0.55mm 的酸洗玻璃珠，涡旋振荡 10 分钟，静置几分钟让玻璃珠 沉淀，小心吸取上清到一个新管后接后续步骤4。
3：13,000rpm 离心1分钟，尽可能吸弃上清，加 180μl 缓冲液YB充分重悬细胞团。
4：加入 20μl 的蛋白酶 K 溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
5：将混合物放置在 55°C水浴消化直到消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
第5步请注意：所需消化时间和酵母数量、种类和生长状态有关，一般 15 分钟即可，但是如果方便的话消化过夜也无不良影响。可选步骤，一般不需要: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成操作步骤 5 后加 20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振荡混 匀，室温放置5-10 分钟。
6：加入 200μl 结合液 CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70°C放置 10 分钟。
7：冷却后加入 100μl 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
8：将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中，(吸附柱放入收集管中)13,000rpm 离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。
9：加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 离心30 秒，弃废液。
10：加入 600μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
11：加入 600μl 漂洗液 WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
12：将吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
13：取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 100μl 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65-70°C水浴中预热效果更好)， 室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000rpm 离心1分钟。
第13步注意：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于 50μl，体积过小降 低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。
14：DNA 可以存放在 2-8°C，如果要长时间存放，可以放置在-20°C。
1：介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理 后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若 不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至 37°C使沉淀完全消失。
2：使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。
操作步骤
第一次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次 加入。
吸取使用量的 Sorbitol buffer 加入 0.2%β-巯基乙醇，回复到室温备用。
1：取 1-3 毫升酵母培养物(不超过 3X107 cells，最好是早对数生长期)，12,000rpm 离心 30 秒，尽可能的吸弃上清，收集菌体。收集超过 1.5 毫升菌液，可以离心弃上清后，在同一个 1.5ml 管内加入更多的菌液，重复步骤 1，直到收集到足够的菌体。
2:加入 300μl Sorbitol buffer，轻柔吹打充分重悬细胞;再加入 50μl Lytic Enzyme 储液，充分颠倒混匀，37°C温育 1-3 小时消化细 胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。
第2步请注意：如果破壁效果不好导致产量低，可以加大 lytic Enzyme 用量来提高酶工作浓度，还可以延长消化时间或者提高温度到 45°C来 提高效果，不适合 Lytic Enzyme 消化的酵母可选用其它方法如 0.5mm 玻璃珠涡旋击打 ，反复冻融等。玻璃珠法:向菌体中 加入 180μl 缓冲液 YB 彻底悬浮菌体，加入 0.1g 直径为 0.45-0.55mm 的酸洗玻璃珠，涡旋振荡 10 分钟，静置几分钟让玻璃珠 沉淀，小心吸取上清到一个新管后接后续步骤4。
3：13,000rpm 离心1分钟，尽可能吸弃上清，加 180μl 缓冲液YB充分重悬细胞团。
4：加入 20μl 的蛋白酶 K 溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
5：将混合物放置在 55°C水浴消化直到消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
第5步请注意：所需消化时间和酵母数量、种类和生长状态有关，一般 15 分钟即可，但是如果方便的话消化过夜也无不良影响。可选步骤，一般不需要: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成操作步骤 5 后加 20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振荡混 匀，室温放置5-10 分钟。
6：加入 200μl 结合液 CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70°C放置 10 分钟。
7：冷却后加入 100μl 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
8：将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中，(吸附柱放入收集管中)13,000rpm 离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。
9：加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 离心30 秒，弃废液。
10：加入 600μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
11：加入 600μl 漂洗液 WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
12：将吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
13：取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 100μl 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65-70°C水浴中预热效果更好)， 室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000rpm 离心1分钟。
第13步注意：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于 50μl，体积过小降 低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。
14：DNA 可以存放在 2-8°C，如果要长时间存放，可以放置在-20°C。
产品特点：
1：离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
2：不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3：快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。
4：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。
2：不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3：快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。
4：多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。
组分：
| 组分名称 | 50T | 储存 |
| 平衡液 | 5mL | RT |
| 缓冲液 YB | 20mL | RT |
| 结合液 CB | 11mL | RT |
| 抑制物去除液 IR | 25mL | RT |
| 漂洗液 WB | 13mL | RT |
| 洗脱缓冲液 EB | 15mL | RT |
| Lytic Enzyme | 2.5mL | -20°C |
| 蛋白酶 K 粉 20mg/mL | 1mL | -20°C |
| 吸附柱 AC | 50个 | RT |
| 收集管(2mL) | 50个 | RT |
注意事项：
1：结合液 CB 或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37°C水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2：蛋白酶 K 保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输。收到后，不超过 25°C室温至少保存6个月，4°C保存 12 个月，-20°C保存 2年。
3：Lytic Enzyme 为蜗牛酶甘油储液，因此比较粘稠，请小心取用，-20°C保存。 蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶。适合破碎溶解各种酵母的细胞壁。
4：避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
5：所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
6：开始实验前将需要的水浴先预热到 37°C和 70°C备用。
7：结合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时， 要用大量清水或者生理盐水冲洗。
8：用户需要自备 Sorbitol buffer( 1M 山梨醇， 0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巯基乙醇)。配制方法:在 600 ml 去离子水里面溶解 182.2 克山梨醇，加入 200 ml 0.5 M Na2EDTA (pH 8.0) ，不需要调节 PH 值，定容到 1L，4°C保存。临用前加 0.2%β-巯基乙醇
9：菌体浓度检测一般 OD600 值为 1 的时候,酿酒酵母细胞是 1-2x107 cells/ml，由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量 OD 值 变化也很大，以上仅供参考。
10：洗脱液EB不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批 pH 大于 7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20°C。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mMEDTA，pH 8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
2：蛋白酶 K 保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输。收到后，不超过 25°C室温至少保存6个月，4°C保存 12 个月，-20°C保存 2年。
3：Lytic Enzyme 为蜗牛酶甘油储液，因此比较粘稠，请小心取用，-20°C保存。 蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶。适合破碎溶解各种酵母的细胞壁。
4：避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
5：所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
6：开始实验前将需要的水浴先预热到 37°C和 70°C备用。
7：结合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时， 要用大量清水或者生理盐水冲洗。
8：用户需要自备 Sorbitol buffer( 1M 山梨醇， 0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巯基乙醇)。配制方法:在 600 ml 去离子水里面溶解 182.2 克山梨醇，加入 200 ml 0.5 M Na2EDTA (pH 8.0) ，不需要调节 PH 值，定容到 1L，4°C保存。临用前加 0.2%β-巯基乙醇
9：菌体浓度检测一般 OD600 值为 1 的时候,酿酒酵母细胞是 1-2x107 cells/ml，由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量 OD 值 变化也很大，以上仅供参考。
10：洗脱液EB不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批 pH 大于 7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20°C。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mMEDTA，pH 8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
保存条件：
室温 12个月
自备试剂：
无水乙醇(E20003)
异丙醇(I20020)
巯基乙醇(M50011)
异丙醇(I20020)
巯基乙醇(M50011)
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
