产品简介:
本产品经过特殊改进的植物 DNA 抽提液内(添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿 抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质(根据需要,上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组 DNA,进一步去除其它各种杂质),然后 基因组 DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖、多酚和细 胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。
操作步骤:
第一次使用前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加入指定量的无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
取所需适量裂解液PL放置在65°C预热,使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。
1:取适量植物组织(新鲜组织 100 mg 或干重组织 30 mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
2:转移细粉到一个 1.5ml 离心管,不要解冻,加 600μl 65°C预热的裂解液 PL (确认已加入 β-巯基乙醇至 2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。
第2步请注意:如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆 10 秒的步骤帮助裂解。
3:65°C水浴 20-30 分钟,在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
第3步注意:属于可选步骤,如果预计样品 RNA 丰富易残留,可在水浴前加入 5-6μl RNA 酶(20mg/ml)。如果组织干燥或者产量低,可以适当延长水浴时间。
如果提取的DNA残留RNA较多导致电泳时候条带拖尾,条带扭曲,背景很高等不正常电泳情况,可以加 1% RNA 酶(10mg/ml) 37°C或者室温放置半小时即可消化 RNA,消化完后不需要特殊处理便可用于 PCR 或者酶切。
4:加入 700μl 氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比 24:1 混合),颠倒充分混匀几分钟(或者涡旋混匀),13,000rpm 离心 5 分钟。
第4步请注意:属于可选步骤(一般不需要):若提取的植物组织富含多糖多酚,可以在第 4 步前用等体积 Tris 饱和酚(PH8.0)/氯仿(1:1)抽提一遍。
5:小心吸取上清到一个新的 1.5ml 离心管,注意不要吸到界面物质。
第5步请注意:可选步骤(一般不需要):如上清比较浑浊,则可重复步骤 4 一遍,直到得到透亮上清。
6:较精确估算上清量,加入1.5 倍体积结合液 PQ (请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。
7:将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm 离心 30 秒,倒掉收集管 中的废液(先加 700μl 离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。
8:加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm离心 30 秒,弃废液。
9:加入 600μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 秒,弃掉废液。
10:加入 600μl 漂洗液 WB,12,000rpm 离心 30 秒,弃掉废液。
11:将吸附柱 AC 放回空收集管中,13,000rpm 离心 2 分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
12:取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70°C水浴中预 热),室温放置3-5分钟,12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
第12步请注意:洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要 DNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于 50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
13:DNA 可以存放在 2-8°C,如果要长时间存放,可以放置在-20°C。
取所需适量裂解液PL放置在65°C预热,使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。
1:取适量植物组织(新鲜组织 100 mg 或干重组织 30 mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
2:转移细粉到一个 1.5ml 离心管,不要解冻,加 600μl 65°C预热的裂解液 PL (确认已加入 β-巯基乙醇至 2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。
第2步请注意:如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆 10 秒的步骤帮助裂解。
3:65°C水浴 20-30 分钟,在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
第3步注意:属于可选步骤,如果预计样品 RNA 丰富易残留,可在水浴前加入 5-6μl RNA 酶(20mg/ml)。如果组织干燥或者产量低,可以适当延长水浴时间。
如果提取的DNA残留RNA较多导致电泳时候条带拖尾,条带扭曲,背景很高等不正常电泳情况,可以加 1% RNA 酶(10mg/ml) 37°C或者室温放置半小时即可消化 RNA,消化完后不需要特殊处理便可用于 PCR 或者酶切。
4:加入 700μl 氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比 24:1 混合),颠倒充分混匀几分钟(或者涡旋混匀),13,000rpm 离心 5 分钟。
第4步请注意:属于可选步骤(一般不需要):若提取的植物组织富含多糖多酚,可以在第 4 步前用等体积 Tris 饱和酚(PH8.0)/氯仿(1:1)抽提一遍。
5:小心吸取上清到一个新的 1.5ml 离心管,注意不要吸到界面物质。
第5步请注意:可选步骤(一般不需要):如上清比较浑浊,则可重复步骤 4 一遍,直到得到透亮上清。
6:较精确估算上清量,加入1.5 倍体积结合液 PQ (请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。
7:将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm 离心 30 秒,倒掉收集管 中的废液(先加 700μl 离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。
8:加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm离心 30 秒,弃废液。
9:加入 600μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 秒,弃掉废液。
10:加入 600μl 漂洗液 WB,12,000rpm 离心 30 秒,弃掉废液。
11:将吸附柱 AC 放回空收集管中,13,000rpm 离心 2 分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
12:取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70°C水浴中预 热),室温放置3-5分钟,12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
第12步请注意:洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要 DNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于 50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
13:DNA 可以存放在 2-8°C,如果要长时间存放,可以放置在-20°C。
产品特点:
1:离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2:不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3:快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4:数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280 典型的比值达1.7-1.9,长度可达30 kb -50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
2:不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3:快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4:数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280 典型的比值达1.7-1.9,长度可达30 kb -50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
组分:
组分名称 | 50T | 100T |
裂解液 PL | 45mL | 80mL |
结合液 PQ | 15mL | 30mL |
抑制物去除液 IR | 25mL | 50mL |
漂洗液 WB | 15mL | 25mL |
洗脱缓冲液 EB | 15mL | 15mL |
吸附柱 AC | 50个 | 100个 |
收集管(2mL) | 50个 | 100个 |
注意事项:
1:裂解液 PL、或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 55°C水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。结合液 PQ 盐酸胍浓度高,加入乙醇后可能出现一些沉淀不影响使用,直接取上清用。
2:避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3:所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到 13,000rpm 的传统台式离心机,如 Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
4:开始实验前将需要的水浴先预热到 65°C备用。
5:需要自备氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比 24:1 混合)、无水乙醇和 β-巯基乙醇。
6:结合液 PQ 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
7:不同来源的植物组织材料中提取 DNA 的量会有差异,一般 100mg 新鲜组织典型产量可达 3-25μg。
8:洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保 pH>7.5, pH 过低影响洗脱 效率。用水洗脱 DNA 应该保存在-20°C。DNA 如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱 (10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
9:本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积,如果样品DNA含量低或者产量低,需要扩大提取量,还需要另外购买溶液。
2:避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3:所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到 13,000rpm 的传统台式离心机,如 Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
4:开始实验前将需要的水浴先预热到 65°C备用。
5:需要自备氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比 24:1 混合)、无水乙醇和 β-巯基乙醇。
6:结合液 PQ 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
7:不同来源的植物组织材料中提取 DNA 的量会有差异,一般 100mg 新鲜组织典型产量可达 3-25μg。
8:洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保 pH>7.5, pH 过低影响洗脱 效率。用水洗脱 DNA 应该保存在-20°C。DNA 如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱 (10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
9:本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积,如果样品DNA含量低或者产量低,需要扩大提取量,还需要另外购买溶液。
保存条件:
室温 12个月
自备试剂:
无水乙醇(E20003)
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )