中文名称: 通用型DNA提取试剂盒
英文名称: Universal DNA Kit
CAS No:
PS1356 通用型DNA提取试剂盒 适用于动物组织,细胞,血液 和细菌等 (psaitong)
产品简介:
本试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物组织(比如鼠尾、肝脏等),细胞,血液,细菌等多种样品中提取高纯度总 DNA。本品可纯化获得分子量最大为50kb的DNA片段,纯化过程不需要使用苯酚或氯仿等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低 盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切,PCR,Real-Time PCR,文库构建,Southern Blot,分子标记等下游实验。
操作步骤:
一:血液及细胞样本基因组提取
1:处理材料
①:如果提取材料为哺乳动物抗凝血液(无核红细胞),可直接向50-200μl新鲜或冷冻的抗凝血液样品中加入Buffer GTL补足至200μl。
②:如果提取材料为禽类,鸟类,两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,取 5-10μl 新鲜或冷冻的抗凝血液样品,加入Buffer GTL补足至200μl。
③:贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(最大提取量为5x106个细胞),2000rpm(400xg)离心5分钟,弃尽上清,加200μlGTL,振荡至样品彻底悬浮。
第1步注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入 4μl 浓度为100mg/ml的RNase A溶液,涡旋15秒,室温放置2分钟。
2:加入 20μl Proteinase K 溶液,混匀。
3:加入 200μl Buffer GL,涡旋振荡充分混匀,56℃ 水浴 10 分钟。
4:短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入 200μl 无水乙醇,涡旋振荡充分混匀,短暂离心。
第4步请注意:加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
一些组织在加入BufferGL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
5:上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm(约 13,400 xg) 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6:向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7:向吸附柱中加入 500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸 附柱重新放回收集管中。
第7步请注意:如需进一步提高 DNA 纯度,可重复步骤7。
8:12,000 rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
第8步请注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
9:将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入 50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5 分钟,12000rpm 离心1分钟,收集DNA溶液,-20̊C保存DNA。
第9步请注意:如果下游实验对pH值或EDTA 敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在 7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH 值低于7.0时洗脱效率不高。
Buffer GE在65-70℃ 水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200μl BufferGE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12,000 rpm离心1分钟;若洗脱体积小于200 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20 ℃ 保存。
二:动物组织基因组提取
1:材料处理,如果提取材料为动物组织,取25mg(脾组织用量应少于10 mg);如果材料为鼠尾,取一段长度为0.4-0.6 cm的大鼠鼠尾或两段长度为0.4-0.6 cm的小鼠鼠尾。
①:样本进行液氮研磨或切成小块后置于 1.5 ml 离心管中,加入 180 μl Buffer GTL,将不同样品做好标记。
②:若使用匀浆器处理样本,匀浆前向样本中加入不超过 80 μl Buffer GTL,匀浆后加入 100 μl Buffer GTL。
第1步请注意:确保各组织的量不要超出推荐范围。
组织样本在加入Buffer GTL之前用液氮研磨或加入Buffer GTL用匀浆器匀浆处理,可以增加裂解效率。
2:加入 20 μl Proteinase K,涡旋震荡使样品彻底混匀。56℃ 水浴,直至组织完全裂解,孵育过程中可每隔一段时间颠倒或震荡离 心管使样品分散。
第2步请注意:不同组织消化时间不同,通常1-3小时即可完成,鼠尾需要消化6-8小时,必要时过夜消化,不会影响后续操作。
如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质,延长56℃ 孵育时间或再加入 20 μl Proteinase K 消化。
如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl的浓度为100mg/ml 的RNase A溶液,涡旋15秒,室温放置5-10 分钟。
3:加入200μl Buffer GL涡旋震荡充分混匀,70℃ 水浴10分钟。短暂离心后加入200μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。
第3步请注意:加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。一些组织(如脾,肺)在加入 Buffer GL 和无 水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
4:短暂离心,将步骤 3 所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。 12,000 rpm(约 13,400xg )离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5:向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6:向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm。离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7:12,000 rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
第7步请注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切,PCR 等)。
8:将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12,000 rpm 离心1分钟,收集DNA 溶液,-20°C保存DNA。
第8步请注意:如果下游实验对pH值或 EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在 7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH 值低于7.0时洗脱效率不高。
Buffer GE在65-70°C水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200 μl BufferGE 或灭菌水 再次洗脱可以增加产量。
如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12,000 rpm 离心1分钟; 若洗脱体积小于200 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20°C 保存。
三:细菌基因组提取
1:细菌样本预处理
1a:革兰氏阴性菌
①:取细菌培养物 1-5 ml(106-108个细胞,最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中,12,000 rpm(~13,400xg)离心1分钟,尽量吸净上清。
②:向沉淀中加入 180 μl Buffer GTL,振荡使菌体重悬。
③:加入20 μl Proteinase K,涡旋混匀,56°C 孵育,直至菌体完全裂解,孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
第③步请注意:如需去除 RNA,可在上述步骤完成后,加入4 μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液,震荡混匀,室温放置5-10分钟。
④:加入 200 μl Buffer GL,涡旋震荡混匀。
1b:革兰氏阳性菌
①:取细菌培养物 1-5 ml(106-108个细胞,最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中,12,000 rpm(~13,400xg)离心1分钟,尽量吸净上清。
②:加入 180 μl Enzymatic Lysis Buffer(自备)使菌体重悬。
③:37°C 孵育 30 分钟。
④:加入20 μl Proteinase K 涡旋震荡,充分混匀。加入200 μl Buffer GL,涡旋震荡混匀。56°C孵育30分钟。
第④请注意:如果需要,95°C 孵育15分钟可以使病原体失活,但是95°C 孵育会造成一些DNA的降解。
如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4 μl 浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液,震荡混匀,室温放置 5-10 分钟。
2:加入 200 μl 无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。
第2步请注意:加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
3:将步骤 2 所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱(SpinColumns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
4:向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸 附柱重新放回收集管中。
5:向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
第5步请注意:如需进一步提高 DNA 纯度,可重复步骤5。
6:12,000 rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
第6步请注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
7:将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5 分钟,12,000 rpm 离心1分钟,收集DNA溶液,-20°C保存DNA。
第7步请注意:如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其 pH 值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH 值低于7.0时洗脱效率不高。
Buffer GE在65-70°C水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的50-200 μl Buffer GE 或灭菌水 再次洗脱可以增加产量。
如果要提高DNA的终浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟;若洗脱体积小于 200 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE 或灭菌水洗脱。
因为保存在水中的 DNA 会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20°C保存。
产品描述:

本试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物组织(比如鼠尾、肝脏等),细胞,血液,细菌等多种样品中提取高纯度总 DNA。

组分:
组分名称 50T
Buffer GTL 15mL
Buffer GL 15mL
Buffer GW1(concentrate) 13mL
Buffer GW2(concentrate) 15mL
Buffer GE 15mL
Proteinase K* 1mL
Spin Columns DM with Collection Tubes 50个
Proteinase K:可常温保存,开盖后防止空气及枪头污染,放入4度可以保存更长时间。如果出现絮状物,是因为溶解缓冲液中的钙离子在磷酸盐中可能会产生不溶解性沉淀,离心取上清,不影响使用效果。
注意事项:
1:样品应避免反复冻融,否则会导致提取DNA片段较小且提取量下降。
2:如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组,建议在对数生长期早期收集样品。
3:第一次使用前应按试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4:使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀,请将Buffer GL和 Buffer GTL于 56°C水浴重新溶解。
5:如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的 RNase A(100mg/ml),RNase A本试剂盒并未提供,可单独订购。
保存条件:
室温 12个月
自备试剂:
无水乙醇(E20003)
Enzymatic Lysis Buffer(提取革兰氏阳性菌基因组 DNA 时须准备,配方:20 mM Tris,pH 8.0;2 mM,EDTA-Na2;1.2%Triton X-100;终浓度为 20mg/ml 的溶菌酶(Lysozyme)。
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献

本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)

摩尔浓度计算公式

  • =
    *
    *
    *选择对应的单位 *空出希望得到的变量,填写另外两个变量

用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积

稀释公式

稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )

  • * = *

连续稀释计算器方程

  • 连续稀释

  • 初始浓度:
  • 稀释倍数:
  • 计算结果

  • C1=C0/X C1: LOG(C1):
    C2=C1/X C2: LOG(C2):
    C3=C2/X C3: LOG(C3):
    C4=C3/X C4: LOG(C4):
    C5=C4/X C5: LOG(C5):
    C6=C5/X C6: LOG(C6):
    C7=C6/X C7: LOG(C7):
    C8=C7/X C8: LOG(C8):