中文名称: SDS裂解液
英文名称:
CAS No:
分子式:
分子量:
PS0116 SDS裂解液 (psaitong)
产品简介:
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,例如 Triton、SDS、NP-40 等。SDS 裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一种枀其强烈的细胞组织快速裂解液并获得总蛋白质。其裂解液强度大于NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(弱)、RIPA 裂解液(中)、通用细胞裂解液、Western 及 IP 细胞裂解液,所获得的蛋白质可以用于 Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等。 SDS Lysis Buffer 主要由 Tris-HCl、NaCl、SDS 等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
操作步骤:
(一)贴壁培养细胞
1、取 SDS Lysis Buffe 室温溶解混匀,使用前取适量裂解液加入 PMSF,使终浓度为 1mM。
2、去除贴壁细胞的培养液,用 PBS、NS 或无血清培养液清洗 1 次,低速离心,弃上清,留取沉淀。
3、按照 6 孔板每孔加入 150~250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例加入 SDS Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞 1~3s 内,细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于 CHIP, 应置于冰上或 4℃裂解 15~30min。通常 6孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200~250μl。
4、10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、进行后续的 Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、取 SDS Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后,使用前取适量裂解液加入 PMSF,使其最终浓度为 1mM。
2、低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞,使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150~250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,加入 SDS Lysis Buffer。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200~250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。通常裂解液作用于细胞 1~3s 内,细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于 CHIP, 置于冰上或 4℃裂解 15~30min。
4、10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、进行后续的 Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(三)组织样本
1、取 SDS Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,使用前取适量裂解液加入 PMSF,使其最终浓度为 1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在 1~2min 之内,以减少蛋白的降解。
4、按 20mg 组织加入 150~250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 15~30min。如果是所提蛋白样品用于 CHIP,置于冰上或 4℃继续裂解 10~20min。
5、步骤 3、4 亦可以采用如下过程:按照每 20mg 组织加入 150~250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 SDS Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,过程尽量控制在1~2min 之内,以减少蛋白的降解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或 4℃继续裂解 10~20min。
6、10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
7、进行后续的 Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。
组分:
产品名称 规格 Storage
SDS裂解液 100ml -20℃
注意事项:
1、去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以丌用清洗。
2、如果裂解丌充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
3、在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/离心管,然后再裂解。少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
4、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,丌必使用匀浆器,缺点是丌如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5、溶解 SDS Lysis Buffer 时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
6、细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或 4℃进行。
保存条件:
-20℃,12个月
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献

本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)

摩尔浓度计算公式

  • =
    *
    *
    *选择对应的单位 *空出希望得到的变量,填写另外两个变量

用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积

稀释公式

稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )

  • * = *

连续稀释计算器方程

  • 连续稀释

  • 初始浓度:
  • 稀释倍数:
  • 计算结果

  • C1=C0/X C1: LOG(C1):
    C2=C1/X C2: LOG(C2):
    C3=C2/X C3: LOG(C3):
    C4=C3/X C4: LOG(C4):
    C5=C4/X C5: LOG(C5):
    C6=C5/X C6: LOG(C6):
    C7=C6/X C7: LOG(C7):
    C8=C7/X C8: LOG(C8):