| 中文名称: | Purmorphamine 促销 一键复制产品信息 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | Purmorphamine | ||||
| 别名: | 2-(1-Naphthoxy)-6-(4-morpholinoanilino)-9-cyclohexylpurine | ||||
| CAS No: | 483367-10-8 | 分子式: | C31H32N6O2 | 分子量: | 520.62 |
| CAS No: | 483367-10-8 | ||||
| 分子式: | C31H32N6O2 | ||||
| 分子量: | 520.62 | ||||
包装规格：
5mg 25mg 100mg in glass bottle
产品简介：
一种平滑受体 (smoothened/Smo receptor) 激动剂，EC50 为 1 μM。
溶解性：
溶于DMSO(5 mg/mL 加热）
储备液保存：
-80°C, 2 years
-20°C, 1 year
-20°C, 1 year
体内实验：
1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→40% PEG300→5% Tween-80→45% Saline
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.80 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。
2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.80 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-环糊精）粉末定容于 10 mL 的生理盐水中，完全溶解至澄清透明。
3、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% Corn Oil
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.80 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.80 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。
2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.80 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-环糊精）粉末定容于 10 mL 的生理盐水中，完全溶解至澄清透明。
3、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO→90% Corn Oil
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.80 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。
以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。
靶点：
IC50: 1.5 μM (Smoothened)
体外研究：
根据 MTT 测定，Purmorphamine (10, 20 μM) 与西罗莫司联合使用可显著减少细胞数量。Purmorphamine 在第 14 天诱导碱性磷酸酶活性和 RUNX-2 表达上调。诱导后第 14 天，在 3 和 5 μM 剂量的 purmorphamine 下检测到骨钙素上调。
无论有无 Purmorphamine，基质矿化均保持不变。Purmorphamine 诱导小鼠 ES 细胞系 ES14 和间充质干细胞系 C3H10T1/2 中的 STAT3 磷酸化。Purmorphamine 上调人类骨髓间充质细胞中成骨细胞表型标志物（ALP 活性和骨样结节形成）的表达。
无论有无 Purmorphamine，基质矿化均保持不变。Purmorphamine 诱导小鼠 ES 细胞系 ES14 和间充质干细胞系 C3H10T1/2 中的 STAT3 磷酸化。Purmorphamine 上调人类骨髓间充质细胞中成骨细胞表型标志物（ALP 活性和骨样结节形成）的表达。
激酶实验：
结合实验
使用BODIPY-Cyclopamine和过表达Smo的细胞进行Smo结合实验，使用CMV启动子, 含SV40起点的表达载体，获得Smo-Myc3，缺失突变体Smo CRD (68到182位氨基酸缺失), 和Smo CT (556到793位氨基酸缺失)。HEK 293T细胞在12孔板中的聚-D-赖氨酸处理的玻璃盖玻片上生长，直到70％汇合，然后使用FuGene 6，通过适当的表达载体(每孔0.5g)进行转染。转染两天后，HEK 293T细胞与含0.5％小牛血清，5 nM BODIPY-Cyclopamine，和不同浓度的Purmorphamine (0, 1.5, 或5 M) (每孔1 mL)的 DMEM培养基在37°C下温育1小时。然后使用1×PBS缓冲液（每孔1 mL）洗涤过表达Smo的细胞，置于含DAPI的培养基，使用Leica DM4500B荧光显微镜观察。使用固定细胞进行结合检测，使用溶于1×PBS缓冲液（每孔1 mL）的3％多聚甲醛在室温下固定过表达Smo的HEK293T细胞10分钟，然后使用含10mM甘氨酸和0.2％叠氮化钠的1×PBS缓冲液（每孔1 mL）处理5分钟，使用1×PBS缓冲液（每孔1 mL）洗涤，然后再使用含Purmorphamine的培养基在室温下处理4小时。
使用BODIPY-Cyclopamine和过表达Smo的细胞进行Smo结合实验，使用CMV启动子, 含SV40起点的表达载体，获得Smo-Myc3，缺失突变体Smo CRD (68到182位氨基酸缺失), 和Smo CT (556到793位氨基酸缺失)。HEK 293T细胞在12孔板中的聚-D-赖氨酸处理的玻璃盖玻片上生长，直到70％汇合，然后使用FuGene 6，通过适当的表达载体(每孔0.5g)进行转染。转染两天后，HEK 293T细胞与含0.5％小牛血清，5 nM BODIPY-Cyclopamine，和不同浓度的Purmorphamine (0, 1.5, 或5 M) (每孔1 mL)的 DMEM培养基在37°C下温育1小时。然后使用1×PBS缓冲液（每孔1 mL）洗涤过表达Smo的细胞，置于含DAPI的培养基，使用Leica DM4500B荧光显微镜观察。使用固定细胞进行结合检测，使用溶于1×PBS缓冲液（每孔1 mL）的3％多聚甲醛在室温下固定过表达Smo的HEK293T细胞10分钟，然后使用含10mM甘氨酸和0.2％叠氮化钠的1×PBS缓冲液（每孔1 mL）处理5分钟，使用1×PBS缓冲液（每孔1 mL）洗涤，然后再使用含Purmorphamine的培养基在室温下处理4小时。
细胞实验：
细胞系：C3H10T1/2 细胞
浓度：0.5-10 μM
孵育时间：4 天
方法：C3H10T1/2细胞在T175烧瓶中扩增，第13通道的细胞通过胰蛋白酶/EDTA分离，然后在生长培养基中稀释。使用Multi-dropTM液体传输系统，将产生的细胞悬浮液按每孔2500个细胞接种到黑色透明底384孔板中，孔中为100 µL生长培养基。温育过夜后，细胞附着到孔的底部。使用Mini TrakTM多位分配系统，将溶于DMSO (500 nL)的每组Purmorphamine储存液输送到对应孔中，确保Purmorphamine终浓度为5μM。然后细胞置于37°C下含5% CO2的空气中温育。4天后，除去培养基，10 μL被动裂解缓冲液加入到每孔中。5分钟后，10 μL碱性磷酸酶底物溶液添加到每孔中。在室温下温育15分钟后，在Acquest高通量酶标仪上对实验板进行读数。
浓度：0.5-10 μM
孵育时间：4 天
方法：C3H10T1/2细胞在T175烧瓶中扩增，第13通道的细胞通过胰蛋白酶/EDTA分离，然后在生长培养基中稀释。使用Multi-dropTM液体传输系统，将产生的细胞悬浮液按每孔2500个细胞接种到黑色透明底384孔板中，孔中为100 µL生长培养基。温育过夜后，细胞附着到孔的底部。使用Mini TrakTM多位分配系统，将溶于DMSO (500 nL)的每组Purmorphamine储存液输送到对应孔中，确保Purmorphamine终浓度为5μM。然后细胞置于37°C下含5% CO2的空气中温育。4天后，除去培养基，10 μL被动裂解缓冲液加入到每孔中。5分钟后，10 μL碱性磷酸酶底物溶液添加到每孔中。在室温下温育15分钟后，在Acquest高通量酶标仪上对实验板进行读数。
保存条件：
-20℃
注意事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、以上信息仅做参考交流之用。
2、以上信息仅做参考交流之用。
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
