| 中文名称: | 潮霉素B 热销 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | Hygromycin B | ||||
| 别名: | 潮霉素B O-6-Amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-(1-2-3)-O-?-D-talopyranosyl(1-5)-2-deoxy-N3-methyl-D-streptamine | ||||
| CAS No: | 31282-04-9 | 分子式: | C20H37N3O13 | 分子量: | 527.52 |
| CAS No: | 31282-04-9 | ||||
| 分子式: | C20H37N3O13 | ||||
| 分子量: | 527.52 | ||||
| MDL: | MFCD06795479 | EINEC: | 250-545-5 | ||
| EINEC: | 250-545-5 | ||||
外观与性状：
类白色或微黄色粉末
包装规格：
250mg 1g in glass bottle
产品简介：
潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素，对原核和真核微生物及细胞有较强的杀伤作用。与G418硫酸氢盐相似，它的最常见的应用是在分子生物学中作为筛选剂。用编码潮霉素B磷酸转移酶的hph基因转化的昆虫和哺乳动物细胞对潮霉素B具有抗性。作为筛选剂的推荐使用浓度范围为10-400 µg/ml。
原核细胞： 100 µg/ml
低等真核细胞 ：200 µg/ml
高等真核细胞 ：150-400 µg/ml
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces
hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
原核细胞： 100 µg/ml
低等真核细胞 ：200 µg/ml
高等真核细胞 ：150-400 µg/ml
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces
hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
溶解性：
溶于水（50mg/ml)
储备液保存：
一：常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
二、 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1、第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2、根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
终浓度（μg/mL） 培养基体积（ml）5mg/ml潮霉素B
加入体积（ml）
50 9.9 0.1
100 9.8 0.2
250 9.5 0.5
500 9.0 1.0
750 8.5 1.5
1000 8.0 2.0
3、第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4、接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5、按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
三、 稳定转染细胞的筛选
转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。
（注意）：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2、 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3、筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4、 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5、之后更换正常培养基培养即可。
四、储运液配置
溶解于无菌细胞培养级1M HEPES buffer (MA0036)或者PBS1X(MA0015)，配置成浓度为50mg/ml. 无菌微膜过滤。然后根据自身实验要求进行稀释或者使用
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
二、 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1、第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2、根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
终浓度（μg/mL） 培养基体积（ml）5mg/ml潮霉素B
加入体积（ml）
50 9.9 0.1
100 9.8 0.2
250 9.5 0.5
500 9.0 1.0
750 8.5 1.5
1000 8.0 2.0
3、第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4、接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5、按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
三、 稳定转染细胞的筛选
转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。
（注意）：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2、 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3、筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4、 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5、之后更换正常培养基培养即可。
四、储运液配置
溶解于无菌细胞培养级1M HEPES buffer (MA0036)或者PBS1X(MA0015)，配置成浓度为50mg/ml. 无菌微膜过滤。然后根据自身实验要求进行稀释或者使用
保存条件：
2-8℃
注意事项：
1、潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了来自E. Coli.之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2、本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3、、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、、以上信息仅做参考交流之用。
2、本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3、、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、、以上信息仅做参考交流之用。
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参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
