| 中文名称: | 巴西芬净A 促销 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 英文名称: | Aureobasidin A | ||||
| 别名: | 金担子素A Aureobasidin A | ||||
| CAS No: | 127785-64-2 | 分子式: | C60H92N8O11 | 分子量: | 1101.42 |
| CAS No: | 127785-64-2 | ||||
| 分子式: | C60H92N8O11 | ||||
| 分子量: | 1101.42 | ||||
产品简介：
金担子素A（Aureobasidin A，AbA）是一种从丝状真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分离出来的环酯肽类抗生素，具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下（0.1-0.5 μg/ml）即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括：出牙酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、构巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。作用机制在于AbA抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干扰鞘脂合成，从而进一步杀死菌株。编码IPC合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的AUR1 基因，以及构巢曲霉的AURA基因，两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性，如AUR1-C基因。 AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。Aureobasidin 对各种酵母菌的最低抑菌浓度请见下表
菌株 MIC（µg/ml）
S.cerevisiae ATCC9763（diploid） 0.2-0.4
SH3328（haploid） 0.1
Sake yeast（diploid） 0.1-0.2
Shochu yeast（diploid） 0.1
Beer yeast（triploid or tetraploid） 0.1
Baker’s yeast（diploid） 0.2-0.4
Schizo.pombe JY-745（monoploid） 0.1
C.albicans TIMM-0136（diploid） 0.04
C.tropicalis TIMM-0324（diploid） 0.08
菌株 MIC（µg/ml）
S.cerevisiae ATCC9763（diploid） 0.2-0.4
SH3328（haploid） 0.1
Sake yeast（diploid） 0.1-0.2
Shochu yeast（diploid） 0.1
Beer yeast（triploid or tetraploid） 0.1
Baker’s yeast（diploid） 0.2-0.4
Schizo.pombe JY-745（monoploid） 0.1
C.albicans TIMM-0136（diploid） 0.04
C.tropicalis TIMM-0324（diploid） 0.08
储备液保存：
-80°C, 6 months
-20°C, 1 month
-20°C, 1 month
操作步骤：
使用方法（抗AbA的酵母转化系统；供参考）：
1、加入0.5 ml过夜培养的酵母到50 ml YPD培养基中（配方：1L液体培养基含有10g yeast extract，20g polypeptone， 20g D-glucose；固体培养基另外加入2%琼脂；）
2、30℃培养约6小时，测定OD660为1～2。使用二倍体时，测定OD660为2～4。
3、1,000×g离心5分钟。
4、用10 ml Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA）悬浮沉淀，1,000×g离心5分钟。
5、用Solution A重悬沉淀，直到OD660为150
6、在管内分取100 µl细胞悬浮液，30℃培养1小时
7、加入5 μg载体（环状或线性DNA）和150 μg Carrier DNA（已经过100℃加热10分钟，并迅速冷却）
【注】：pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化
8、加入850 µl Solution B（配方：取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解，需要现用现配），轻轻混匀。
9、30℃培养30分钟后，42℃培养15分钟。
10、室温放置10分钟。
11、5,000 rpm离心1分钟，用5 ml YPD培养基悬浮沉淀。
12、30℃培养6小时~过夜。
13、5,000~10,000 rpm离心，用1-10 ml 0.9% NaCl悬浮沉淀。
14、在YPD选择培养基平板（含有一定浓度的AbA，依菌株类型而定）上接种100 µl细胞悬液。30℃培养3-4天后转化完成。
15、挑取阳性转化子，和/或测定转化效率（以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示）。
1、加入0.5 ml过夜培养的酵母到50 ml YPD培养基中（配方：1L液体培养基含有10g yeast extract，20g polypeptone， 20g D-glucose；固体培养基另外加入2%琼脂；）
2、30℃培养约6小时，测定OD660为1～2。使用二倍体时，测定OD660为2～4。
3、1,000×g离心5分钟。
4、用10 ml Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA）悬浮沉淀，1,000×g离心5分钟。
5、用Solution A重悬沉淀，直到OD660为150
6、在管内分取100 µl细胞悬浮液，30℃培养1小时
7、加入5 μg载体（环状或线性DNA）和150 μg Carrier DNA（已经过100℃加热10分钟，并迅速冷却）
【注】：pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化
8、加入850 µl Solution B（配方：取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解，需要现用现配），轻轻混匀。
9、30℃培养30分钟后，42℃培养15分钟。
10、室温放置10分钟。
11、5,000 rpm离心1分钟，用5 ml YPD培养基悬浮沉淀。
12、30℃培养6小时~过夜。
13、5,000~10,000 rpm离心，用1-10 ml 0.9% NaCl悬浮沉淀。
14、在YPD选择培养基平板（含有一定浓度的AbA，依菌株类型而定）上接种100 µl细胞悬液。30℃培养3-4天后转化完成。
15、挑取阳性转化子，和/或测定转化效率（以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示）。
保存条件：
-20°C，一年。
注意事项：
1、AbA的最佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异，可根据最低抑菌浓度（MIC）来确定。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、以上信息仅做参考交流之用。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、以上信息仅做参考交流之用。
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参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
