产品简介
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聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS~PAGE)其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应，它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及 SDS~聚丙烯酰胺凝胶(SDS~PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。 一步法凝胶制备试剂盒(15%)经改良优化，把所需的 Tris-HCl、丙烯酰胺、SDS 等预混于分离胶缓冲液(下层胶)和浓缩胶缓冲液(上层胶)中，可直接配制 15%的分离胶和 5%的浓缩胶溶液，使用前按比例加入过硫酸铵和 TEMED 灌入玻璃板，操作简单。利用本试剂盒配置的预制胶，可高效兼容传统的电泳液及转膜液，10T 一般可以配制 10 块，具体配制的量应根据器具大小决定，15%的分离胶最佳分离范围是 12~60kD。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。 |
组成：
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产品名称 |
规格 |
Storage |
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试剂(A): 下层胶预混液(15%) |
250ml |
4℃ 避光 |
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试剂(B): 上层胶预混液 |
120ml |
4℃ 避光 |
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试剂(C): APS |
0.5g |
RT |
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试剂(D): TEMED |
1ml |
4℃ 避光 |
自备材料：
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1、垂直电泳装置 |
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2、移液器 |
操作步骤(仅供参考)：
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1、配制 10%过硫酸铵：直接在 0.5g APS 中加入 5ml 蒸馏水，充分溶解，分装成小份储 存于-20℃或 4℃。注意：一般用 1.5ml EP 管分装成 0.5~1ml 每支，每支使用 2~3 次 即弃用；-20℃保存，通常半年内有效，4℃保存，1 周有效。 |
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2、将玻璃板固定好，并确定不会漏液，按照下表配制 15%的分离胶(下层胶)：对于普通的 配胶器，一般按 10ml 体积配制即可，取适量的混匀分离胶缓冲液倒入玻璃板中，加入1ml 左右的蒸馏水以压平液面。注意：过硫酸铵和 TEMED 严格按照推荐量加入，且应 充分混匀。 |
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成分 |
配制不同体积 SDS~PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml) |
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下层胶预混液 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
40 |
50 |
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10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
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3、按照下表配制 5%的浓缩胶(上层胶)：对于普通的配胶器，一般按 3ml 体积配制即可，倒出蒸馏水，取适量的混匀浓缩胶缓冲液倒入玻璃板中。注意：过硫酸铵和 TEMED 严格按照推荐量加入，且应充分混匀。 |
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成分 |
配制不同体积 SDS~PAGE 浓缩胶所需各成分的体积(ml) |
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上层胶预混液 |
2 |
3 |
4 |
6 |
8 |
10 |
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10%过硫酸铵 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
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|
TEMED |
0.002 |
0.003 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
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4、缓缓插入梳子，为确保分离胶与浓缩胶界面更加整齐，插入梳子后可轻轻抬起制胶架的 一端然后轻轻放下，使缓冲液有个缓慢的移动，从而界面更加整齐。 |
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5、室温放置 30min 直至胶凝固。 |
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6、电泳：静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔；加入 Tris-甘氨酸电泳 缓冲液(含 15~20%甲醇)；将待测蛋白与蛋白上样缓冲液混合，煮沸 5~10min 后加入 样品孔；将电泳槽置于 4℃或冰水浴中电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。 |
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注意事项：
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1、下层胶预混液和上层胶预混液中含有 Acr~Bis，对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 |
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2、过硫酸铵配制成 10%溶液后应当-20℃保存，应尽量减少室温存放时间以防失效；有效避免失效的方法是分成小份,-20℃保存，用 2~3 次，剩余的弃用，亦可 4℃保存几天。 |
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3、TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖，另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。 |
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4、冬天室温较低时，可以自行额外添加少量 TEMED 以促进凝胶凝固；室温在 20ºC 以上时通常不需要再额外添加 TEMED；室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。 |
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5、TEMED 易燃，有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。 |
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6、配好的凝胶如果当天不能使用，可在 4ºC 保存 1~2 天。 |
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7、该试剂盒仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 |
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8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
有效期：12 个月有效；常温运输，4℃保存。
附录：不同浓度的 SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围：
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SDS~PAGE 分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
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6%胶 |
50~150kD |
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8%胶 |
30~90kD |
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10%胶 |
20~80kD |
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12%胶 |
12~60kD |
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15%胶 |
10~40kD |
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
