包装规格：
100mL
产品简介：
TRIgent是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围广泛，可以从动物组织、 植物材料、 各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。 该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×10⁶)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>10⁷)均有较好的分离效果。样品在TRIgent中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA 分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、体外翻译等。TRIgent能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb(28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
注意：普通琼脂糖凝胶电泳，28S的位置大约在2kb，18S大约在1kb的位置，不同浓度的凝胶位置变化较大。
注意：普通琼脂糖凝胶电泳，28S的位置大约在2kb，18S大约在1kb的位置，不同浓度的凝胶位置变化较大。
操作步骤：
1：匀浆
a:植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIgent中迅速研磨，每50-100mg组织加入1ml TRIgent，混匀。注意：样品体积一般不要超过TRIgent体积的10%。
b:动物组织：取新鲜或-70˚C冻存动物组织尽量剪碎，每30-100mg组织加入1ml TRIgent，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIgent 1ml混匀。注意：样品体积一般不要超过TRIgent体积的10%。
c:单层培养细胞：尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml 的TRIgent覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIgent量（每10cm2加1ml）。当TRIgent 量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶/皿脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破裂开并已释放出全部RNA，继续做即可。
d:细胞悬液： 离心收集细胞。 在TRIgent 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5-10×106的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml的TRIgent。在加入TRIgent 前应避免洗涤细胞，因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
2:将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
3：可选步骤： 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟，取上清。如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或肌肉，植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时，上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。
4：每1ml TRIgent加0.2ml氯仿。盖紧管盖，剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2-3分钟。
5：在4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层：下层红色有机苯酚氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIgent 容量的50-60%。（有机层和中间层是蛋白和DNA，如果需要提取，请联系我们索取提取方法）。
6：将水样层转移到一干净的离心管中，加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。
注意：RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
7：在室温或者4°C 12,000 rpm 离心10分钟，弃上清。
8：加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1 ml TRIgent用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
9：在室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟，弃上清，注意不要丢失RNA沉淀。
注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
10：室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl RNase free water，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。
11：注意
a:抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。
b: 在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。
c: 如无特殊说明，所有的操作应该在在15-30°C的室温条件下。
a:植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIgent中迅速研磨，每50-100mg组织加入1ml TRIgent，混匀。注意：样品体积一般不要超过TRIgent体积的10%。
b:动物组织：取新鲜或-70˚C冻存动物组织尽量剪碎，每30-100mg组织加入1ml TRIgent，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIgent 1ml混匀。注意：样品体积一般不要超过TRIgent体积的10%。
c:单层培养细胞：尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml 的TRIgent覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIgent量（每10cm2加1ml）。当TRIgent 量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶/皿脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破裂开并已释放出全部RNA，继续做即可。
d:细胞悬液： 离心收集细胞。 在TRIgent 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5-10×106的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml的TRIgent。在加入TRIgent 前应避免洗涤细胞，因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
2:将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
3：可选步骤： 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟，取上清。如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或肌肉，植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时，上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。
4：每1ml TRIgent加0.2ml氯仿。盖紧管盖，剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2-3分钟。
5：在4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层：下层红色有机苯酚氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIgent 容量的50-60%。（有机层和中间层是蛋白和DNA，如果需要提取，请联系我们索取提取方法）。
6：将水样层转移到一干净的离心管中，加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。
注意：RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
7：在室温或者4°C 12,000 rpm 离心10分钟，弃上清。
8：加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1 ml TRIgent用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
9：在室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟，弃上清，注意不要丢失RNA沉淀。
注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
10：室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl RNase free water，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。
11：注意
a:抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。
b: 在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。
c: 如无特殊说明，所有的操作应该在在15-30°C的室温条件下。
注意事项：
1：本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
2：样品匀浆后，如果不即刻加入氯仿之前，，置于-70°C下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
3：若下游实验对DNA非常敏感，建议用 RNase free DNase I对RNA进行处理。
4：自备试剂：氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、 RNase free water或者DEPC处理过的水。
2：样品匀浆后，如果不即刻加入氯仿之前，，置于-70°C下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
3：若下游实验对DNA非常敏感，建议用 RNase free DNase I对RNA进行处理。
4：自备试剂：氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、 RNase free water或者DEPC处理过的水。
保存条件：
2-8℃
UN码：
HazardClass：
危害声明：
安全说明：
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为：C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
