SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 - CAS号查询_生物试剂_化学试剂_分析试剂

中文名称:	SDS-PAGE凝胶配制试剂盒
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PS0148 SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 (psaitong)

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产品简介：

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE)，其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。SDS-PAGE凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可配制非变性(native)PAGE凝胶，具体配制的量应根据器具大小决定。

操作步骤：

1：配制10%过硫酸铵：直接在0.5g Ammonium Persulfate 中加入5ml 蒸馏水(1g 每瓶加入10ml 蒸馏水)，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或4℃。
2、根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照说明书配制分离胶(下层胶)。
3：按照如说明书格配制SDS-PAGE 的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)。
4：电泳：静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔，加入Tris-甘氨酸电泳缓冲液，将待测蛋白与蛋白上样缓冲液混合，煮沸5-10min 后加入样品孔，电泳，丽春红验证蛋白转膜是否成功。
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：

SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
6%胶	50-150kD
8%胶	30-90kD
10%胶	20-80kD
12%胶	12-60kD
15%胶	10-40kD

成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（ml）
6%胶	5	10	15	20	30	50
蒸馏水	2.7	5.4	8.1	10.8	16.2	27
30% Acr-Bis (29:1)	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0	6.0
1.5M Tris-HCl(pH8.8)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
10% SDS	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
TEMED	0.004	0.008	0.012	0.016	0.024	0.04
成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（ml）
8%胶	5	10	15	20	30	50
蒸馏水	2.4	4.7	7.1	9.5	14.2	23.7
30% Acr-Bis (29:1)	1.3	2.7	4.0	5.3	8.0	13.3
1.5M Tris-HCl(pH8.8)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
10% SDS	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
TEMED	0.003	0.006	0.009	0.012	0.018	0.03
成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（ml）
10%胶	5	10	15	20	30	50
蒸馏水	2.0	4.1	6.1	8.1	12.2	20.3
30% Acr-Bis (29:1)	1.7	3.3	5.0	6.7	10.0	16.7
1.5M Tris-HCl(pH8.8)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
10% SDS	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02
成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（ml）
12%胶	5	10	15	20	30	50
蒸馏水	2.0	4.0	6.0	8.0	12.0	20.0
30% Acr-Bis (29:1)	2.0	4.0	6.0	8.0	12.0	20.0
1.5M Tris-HCl(pH8.8)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
10% SDS	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02
成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（ml）
15%胶	5	10	15	20	30	50
蒸馏水	1.2	2.4	3.6	4.8	7.2	12.0
30% Acr-Bis (29:1)	2.5	5.0	7.5	10.0	15.0	25
1.5M Tris-HCl(pH8.8)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
10% SDS	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
10%过硫酸铵	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02

按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶（也称堆积胶/积层胶或上层胶）：

成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（ml）
5%胶	1	2	3	4	6	8	10
蒸馏水	0.68	1.4	2.1	2.7	4.1	5.5	6.8
30% Acr-Bis (29:1)	0.17	0.33	0.5	0.67	1.0	1.3	1.7
1.5M Tris-HCl(pH6.8)	0.13	0.25	0.38	0.5	0.75	1.0	1.25
10% SDS	0.01	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
10%过硫酸铵	0.01	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
TEMED	0.001	0.002	0.003	0.004	0.006	0.080	0.01

组分：

产品名称	规格30T	Storage
试剂(A):30% Acr-Bis (29:1)	100ml	4℃避光
试剂(B):1.5M Tris-HCl(pH8.8)	100ml	RT
试剂(C):1M Tris-HCl(pH6.8)	30ml	RT
试剂(D):10% SDS	5ml	RT
试剂(E):Ammonium persulfate (过硫酸铵)	0.5g	RT
试剂(F):TEMED	1ml	4℃ 避光

注意事项：

1：过硫酸铵配制成10%溶液分装后-20℃保存，应尽量减少室温存放时间以防失效，取出的APS 溶液可短期4℃保存，有效避免失效的方法是分成小份，即一般用1.5ml EP 管分装成0.5-1ml 每支，-20℃保存，每支使用2-3 次即弃用。
2：TEMED 极易挥发，使用后请盖紧瓶盖4℃保存，另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3：配制聚丙烯凝胶的过程中如果冬天室温较低情况下，上下层胶出现白色沉淀是正常现象，可以置于37℃水浴锅溶解后使用；冬天气温较低，分离胶凝固较慢，可将胶板置于空调下加速凝固。
4：30%Acr-Bis(29:1)有神经毒性，请小心操作，长期使用置于4℃有助于其性能的稳定。
5：在配胶过程中所使用的长短玻璃板一定要清洗干净，如有胶体附着可能会导致电泳过程中漏样的发生。
6：蛋白进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳要先分清是碱性蛋白还是酸性蛋白，分离碱性蛋白要利用低pH 凝胶系统，分离酸性蛋白要利用高pH 凝胶系统，酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的是pH 8.8 的缓冲系统，蛋白带负电荷，向阳极移动；而碱性蛋白通常在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳分离碱性蛋白。
7：试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
8：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

4℃,避光,12个月

UN码：

HazardClass：

危害声明：

安全说明：

搜索质检报告(COA)

参考文献 & 客户发表文献