中文名称: Western及IP细胞裂解液
英文名称:
CAS No:
分子式:
分子量:
PS0119 Western及IP细胞裂解液 (psaitong)
产品简介:
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,譬如Triton、SDS、NP-40等。Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞,并获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于SDS-PAGE,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,主要由Tris、Triton X-100组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。  用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒(PT0001测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得的样本的蛋白浓度。 
操作步骤:
(一)贴壁培养细胞 
1、 取Western及IP细胞裂解液置于室温溶解混匀后,使用前取适当量的裂解液加入 PMSF,使其最终浓度为1mM。 
2、 去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清, 留取沉淀。
3、 按照6孔板每1孔加入100~200μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Western及IP 细胞裂解液。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞1~5s内,细胞就会被裂解。
4、 10000~12000g,离心3~5min(如果用冷冻离心机4℃离心效果更佳),取上清。
    5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
  (二)悬浮培养细胞
  1、 取Western及IP细胞裂解液置于室温溶解混匀后,使用前取适当量的裂解液加入 PMSF,使其最终浓度为1mM。
  2、 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
3、 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入100~200μl含有PMSF的裂 解液的比例,加入Western及IP细胞裂解液。通常6孔板每孔细胞加入100ul裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150~200μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
  4、 10000~12000g,4℃离心3~5min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。 5、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、 取Western及IP细胞裂解液置于室温溶解混匀后,使用前取适当量的裂解液加入 PMSF,使其最终浓度为1mM。
  2、 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
3、 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控 制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。
     4、 按照每20mg组织加入100~200μl裂解液的比例,加入含有PMSF的裂解液。冰上 或4℃裂解30~60min。
5、 步骤3、4亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入100~200μl裂解液的比例加 入含有PMSF的Western及IP细胞裂解液。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。
6、 按照每20mg组织加入100~200μl裂解液的比例,加入含有PMSF的裂解液。
7、 10000~12000g,4℃离心10~15min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。 
8、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
产品描述:

 

自备材料:
1、 高速离心机
2、 微量移液器 
3、 PMSF 
组分:
产品名称 规格 Storage
Western及IP细胞裂解 50ml 100ml -20℃
注意事项:
1、 在壁培养细胞的操作步骤中,去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰, 可以不用清洗。
2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减 少裂解液的用量。
  3、 在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再 裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
4、 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5、 溶解Regal Cell lysis buffer for Western and IP的时候,应尽量缩短溶解时间, 避免裂解液中的有效成分失效。
  6、 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。
7、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
-20℃,12个月
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献

本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)

摩尔浓度计算公式

  • =
    *
    *
    *选择对应的单位 *空出希望得到的变量,填写另外两个变量

用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积

稀释公式

稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )

  • * = *

连续稀释计算器方程

  • 连续稀释

  • 初始浓度:
  • 稀释倍数:
  • 计算结果

  • C1=C0/X C1: LOG(C1):
    C2=C1/X C2: LOG(C2):
    C3=C2/X C3: LOG(C3):
    C4=C3/X C4: LOG(C4):
    C5=C4/X C5: LOG(C5):
    C6=C5/X C6: LOG(C6):
    C7=C6/X C7: LOG(C7):
    C8=C7/X C8: LOG(C8):