产品简介:
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,例如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液 (强)(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂 解,并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(中)。Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等组成,不含蛋白酶和磷酸酶抑制剂,并维持原有的蛋白间相互作用。
操作步骤:
(一)贴壁培养细胞
1、 取Enhanced RIPA lysis buffer室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、 去除贴壁细胞的培养液,,低速离心,弃上清。
3、 按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于细胞1~3秒内,细胞就会被裂解。
4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
3、 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150~250μl裂解液的比例,加 入Enhanced RIPA Lysis Buffer。
4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、 取Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织,迅速 用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。
3、 按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或 4℃裂解。
4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
1、 取Enhanced RIPA lysis buffer室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、 去除贴壁细胞的培养液,,低速离心,弃上清。
3、 按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于细胞1~3秒内,细胞就会被裂解。
4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
3、 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150~250μl裂解液的比例,加 入Enhanced RIPA Lysis Buffer。
4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、 取Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织,迅速 用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。
3、 按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或 4℃裂解。
4、 离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
产品描述:
组分:
产品名称 | 规格 | Storage |
RIPA裂解液(强,无抑制剂) | 100ml | -20℃ |
注意事项:
1、 去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减 少裂解液的用量。
3、 如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再裂解。
4、 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex 使样品裂解充分。
5、 溶解 RIPA Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免有效成分失效。
6、 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。
7、 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。
2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减 少裂解液的用量。
3、 如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再裂解。
4、 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex 使样品裂解充分。
5、 溶解 RIPA Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免有效成分失效。
6、 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。
7、 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。
保存条件:
-20℃,12个月
UN码:
HazardClass:
危害声明:
安全说明:
搜索质检报告(COA)
参考文献 & 客户发表文献
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为:C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )